OPTN M98K多态性通过p62介导的caspase激活加剧蛋白稳态应激诱导的视网膜细胞凋亡

本研究发现青光眼相关OPTN M98K多态性通过增强p62/SQSTM1蛋白聚集，激活caspase-8/9/3级联反应，显著提高视网膜细胞对蛋白稳态应激的敏感性。该机制揭示了遗传易感性与环境因素协同作用导致青光眼的新分子通路，为靶向p62的神经保护策略提供理论依据。

　　

Section snippets

Cell culture and treatments

661W来源的稳定表达FLAG标记野生型optineurin（WT-OPTN）和M98K-OPTN的细胞系已有文献描述。这些细胞在含10%胎牛血清（FBS）和青霉素-链霉素的DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂的湿润培养箱中培养。大多数实验使用两种WT-OPTN克隆（6号和16号）和两种M98K-OPTN克隆（10号和14号）。

Cell survival assay

MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）检测法

M98K-OPTN expressing cells show enhanced susceptibility to protein homeostasis stress

我们研究了蛋白酶体抑制剂MG132诱导的蛋白稳态应激对稳定表达WT-OPTN和M98K-OPTN的视网膜661W细胞（视网膜神经节细胞前体样细胞）存活的影响。通过FLAG抗体染色，我们证实这些克隆中的所有细胞都表达M98K-OPTN或WT-OPTN（补充图S1）。将WT-OPTN和M98K-OPTN表达细胞各两个克隆铺板，铺板24小时后，用1或2 μM MG132处理16小时，随后进行检测。

Discussion

OPTN的M98K多态性在特定亚洲人群中与青光眼显著相关，但在高加索人群中无此关联。这提示M98K-OPTN多态性可能需要与遗传或环境等其他因素协同作用才能诱发青光眼。多种应激类型，如氧化应激、内质网应激、蛋白稳态应激和TNFα，均与青光眼的发生发展密切相关。