Neuropilin-2通过Wnt/β-catenin通路介导鼻咽癌放射抵抗机制研究

本研究揭示Neuropilin-2（NRP2）通过调控Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白（WNT3a、Axin2、Cyclin D1、p-GSK3β和β-catenin）表达，显著影响鼻咽癌（NPC）细胞的放射敏感性。实验证明NRP2敲除可降低细胞增殖与克隆形成能力（P<0.001），GSEA分析显示Wnt通路显著富集（NES=1.647，p adjust=0.049）。该发现为NPC放射抵抗提供了新治疗靶点。

　　

Abstract

Neuropilin-2（NRP2）与多种恶性肿瘤不良预后相关。本研究旨在阐明NRP2在鼻咽癌（NPC）放射抵抗中的作用及其分子机制。

Introduction

鼻咽癌在中国南方地区高发，约30%患者尽管接受标准治疗仍出现局部复发和远处转移，其主要原因与放射抵抗相关。NPC放射抵抗涉及PI3K/Akt、NF-κB和Wnt等信号通路激活、癌基因改变、缺氧、癌症干细胞增殖及血管生成增强等多因素相互作用。NRP2作为VEGFRs共受体在肿瘤血管生成中起关键作用，其高表达与前列腺癌、甲状腺癌、结直肠癌、乳腺癌和膀胱癌的不良预后相关。初步研究发现放射抵抗细胞系CNE-2R与放射敏感细胞系CNE-2间存在NRP2表达差异。

Materials and Methods

采用CNE-2R细胞系进行NRP2敲低实验，使用三种靶向NRP2基因不同区域的siRNA实现稳定敲低。通过qPCR和Western blot（WB）验证敲低效果，采用CCK-8法和克隆形成实验评估细胞对辐射的反应。通过GEO数据集进行生物信息学分析，包括差异表达和通路富集分析（GSEA），Western blot检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。

Results

NRP2敲低后，qPCR和WB显示mRNA和蛋白表达显著降低（p<0.001）。CCK-8实验表明照射后KD1-NRP2和KD2-NRP2组存活率显著下降（P<0.001）。克隆形成实验显示随辐射剂量增加（0Gy、4Gy、8Gy），敲低组克隆数显著减少（P<0.001）。GEO数据库分析显示NPC组织中NRP2表达显著高于正常组织（p=0.012）。GSEA分析表明Wnt/β-catenin信号通路在NPC中显著富集（NES=1.647，p adjust=0.049，FDR=0.038）。WB检测发现NRP2敲低显著降低WNT3a、Axin2、Cyclin D1、p-GSK3β和β-catenin表达（p<0.05），GSK3β表达无变化。共表达分析显示NRP2与AXIN2（R=0.497）和DKK1（R=-0.414）显著相关。

Discussion

研究表明NRP2敲低可通过抑制Wnt/β-catenin通路增强NPC细胞放射敏感性。该通路中WNT3a激活Dishevelled蛋白，破坏降解复合体，使GSK3β失活（p-GSK3β增加），导致β-catenin积累入核激活靶基因（如Cyclin D1和Axin2）。NRP2与AXIN2的强共表达提示其可能通过调控该通路关键元件影响肿瘤进展。与既往研究一致，Kang等发现NRP2在口腔鳞癌中通过激活Wnt/β-catenin通路促进细胞增殖、迁移和侵袭。研究局限性包括未进行体内实验和迁移侵袭实验，需进一步验证NRP2在放射抵抗中的具体机制。

Conclusion

NRP2通过调节Wnt/β-catenin通路介导NPC放射抵抗，其敲低可显著抑制细胞增殖并增强放射敏感性，表明NRP2可作为NPC潜在治疗靶点。

Ethical Approval

本研究经海南省人民医院机构审查委员会批准（批准号：Med-Eth-Re [2024] 754）。

Disclosure

作者声明无相关利益冲突。