SPINK5基因大片段缺失与c.1258A>G多态性复合突变致Netherton综合征的临床免疫学特征及IVIG治疗机制研究

本研究深入报道一例携带SPINK5基因大片段缺失与c.1258A>G（p.K420E）多态性复合突变的Netherton综合征（NS）患儿，系统性揭示其临床表型、免疫缺陷特征及细胞因子风暴（如IL-17家族、TNF-α显著升高）；通过静脉注射免疫球蛋白（IVIG）治疗显著改善皮肤症状并部分逆转免疫失调，为NS的精准治疗与机制探索提供重要临床证据。

　　

引言

Netherton综合征（NS）是一种罕见的常染色体隐性遗传病，由SPINK5基因突变引起，该基因编码丝氨酸蛋白酶抑制剂LEKTI（Lympho-Epithelial Kazal-type-related Inhibitor）。临床主要表现为先天性鱼鳞病、毛发杆状结构异常和特应性皮炎样病变。LEKTI通过抑制激肽释放酶相关肽酶5（KLK5）和KLK7等丝氨酸蛋白酶，维持皮肤屏障完整性和调节免疫应答。SPINK5突变导致LEKTI功能缺陷，进而引起皮肤屏障破坏、过敏和感染易感性增加。NS患者常伴有免疫异常，包括记忆B细胞减少、IgE升高和促炎细胞因子（如IL-17、TNF-α）水平上升。目前NS尚无根治方法，治疗以对症支持为主，静脉注射免疫球蛋白（IVIG）疗法在一些病例中显示出潜在疗效。

材料与方法

研究对象为一名1岁6个月的东亚男童，其父母健康且无血缘关系。研究经遵义医科大学附属医院伦理委员会批准，并获得监护人知情同意。同时招募14名 demographic 匹配的健康对照。遗传分析采用全外显子组测序和Sanger测序验证SPINK5基因变异，使用引物（正向：5’-CAGGGTTAGGCACATCACATTC-3’；反向：5’-TAAGGAATGCACGTGTTCCCTG-3’）进行PCR扩增。采用扫描电子显微镜观察毛发杆状结构。蛋白质表达通过Western blotting（抗体：LEKTI 29808-1-AP, KLK5 38528）和ELISA（人KLK5检测试剂盒JM-6832H2）分析。外周血淋巴细胞亚群通过流式细胞术（使用抗CD21、IgM、CD38、IgD、CD27、CD19等抗体）检测。细胞因子水平使用Olink Target 48细胞因子 panel 评估。统计学分析采用SPSS 29.0和GraphPad Prism 8，使用双尾Student t检验，P<0.05视为有统计学意义。

结果

临床资料与病史

患儿出生后即表现为全身性鱼鳞病、红皮病和特应性皮炎样病变，伴严重脱屑、红斑和瘙痒，反复呼吸道感染和持续性腹泻，多次住院并接受抗生素治疗，存在生长发育迟缓。血常规显示白细胞计数感染时升高，嗜酸性粒细胞持续增高，血红蛋白、血小板和中性粒细胞正常。扫描电镜发现毛发呈“竹节样”畸形。患儿自出生后接受对症皮肤护理（外用糖皮质激素和润肤剂）及低过敏配方奶粉喂养，但皮疹和生长迟缓仍持续。8月龄起开始每月一次IVIG治疗（500 mg/kg），11个月后皮肤病变显著消退，胃肠道症状缓解，感染频率减少，但停药后疾病复发。

遗传分析与蛋白表达

遗传分析发现患儿携带SPINK5基因的c.1258A>G（p.K420E）多态性和一个约257.8 kb的杂合缺失（chr5:147,443,561-147,719,327），涵盖整个SPINK5基因。Sanger测序验证了多态性。Western blotting显示患者外周血单核细胞（PBMC）中LEKTI表达显著降低，KLK5表达相对较低，但血浆KLK5水平显著升高，与遗传缺陷一致。

多参数流式细胞术免疫评估

IVIG治疗前，患者B细胞区室（包括未转换记忆B细胞、过渡B细胞和浆母细胞）显著减少。治疗后这些亚群明显增加，提示免疫应答增强和B细胞成熟改善。初始T细胞评估未见明显异常，但治疗后总T细胞（包括CD8⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、CD4⁺ TEMRA细胞、CD8⁺ TEMRA细胞、CD4⁺ na?ve和CD8⁺ na?ve T细胞）显著增加，表明T细胞介导的免疫大幅改善。

淋巴细胞亚群评估

与健康对照相比，患者转换记忆B细胞和CD27⁺IgD⁺ 边缘区样（MZ-like）B细胞比例显著降低，而 na?ve B细胞比例升高且治疗后未显著变化。γδ T细胞比例显著升高，IVIG治疗后明显降低。滤泡调节性T细胞（cTfr）、Th1/17细胞和活化CD8⁺ T细胞比例显著升高，治疗后呈下降趋势，趋于正常化。

细胞因子谱分析

IVIG治疗前，患者多种关键细胞因子水平显著升高，包括TGFA、IL17C、IL17A、IL17F、CXCL8、CCL2、TNF、CCL19和IL18。治疗后，CCL2、TNF、CCL19、IL18、IL17F、TGFA和IL17A水平大幅下降，表明IVIG具有显著的免疫调节作用，可能促成临床改善（如炎症减轻和免疫调节增强）。

讨论

本研究全面评估了一名携带SPINK5基因 novel 复合突变（c.1258A>G多态性合并大片段杂合缺失）的NS患儿，其临床表现为典型皮肤病变、免疫缺陷和生长迟缓。遗传变异导致LEKTI表达显著降低，与功能缺陷一致。免疫评估发现特定B细胞亚群减少、γδ T细胞升高及促炎细胞因子风暴，扩展了对NS免疫发病机制的认识。IVIG治疗后，不仅临床症状显著改善，淋巴细胞亚群和细胞因子水平也部分恢复正常，凸显了IVIG在恢复免疫平衡方面的治疗潜力。发现的复合突变类型为全球首次报道，丰富了SPINK5基因突变谱。尽管本研究为单病例报告，结果强调了IVIG在NS管理中的价值，为未来大样本研究和长期疗效评估奠定了基础，有望推动NS的精准治疗策略发展。