13-顺式视黄酸（13cRA）通过CRABP2/RARβ-RXRβ/FoxA1信号轴调控猪卵巢颗粒细胞分化的机制研究

本研究发现维生素A衍生物13-顺式视黄酸（13cRA）通过视黄酸信号分子CRABP2介导的核转运机制，促进RARβ/RXRβ受体异源二聚体形成，进而抑制转录因子FoxA1表达，最终驱动猪卵巢颗粒细胞分化。该研究不仅揭示了13cRA调控哺乳动物卵泡发育与黄体化的新机制，更为开发提高家畜繁殖力的营养调控策略提供了重要理论依据。

　　

Highlight

Experimental Design and Workflow

实验设计与流程如图1所示。首先通过制作卵巢切片统计小鼠卵泡和黄体数量；采用原位杂交技术检测视黄酸信号分子和FoxA1在猪卵巢中的表达定位；分离培养猪卵巢颗粒细胞并进行鉴定。使用MTS法检测细胞活力，通过iCELLigence实时细胞分析仪和EdU染色评估细胞增殖，采用流式细胞术分析细胞周期分布；通过qRT-PCR和Western blot检测细胞分化标志物表达。

Effects of 13cRA on ovarian follicular development and luteinization in mice

为探究13cRA对哺乳动物卵泡发育和黄体化的影响，对小鼠连续一周灌服不同浓度（0.1 mg/kg、1 mg/kg和10 mg/kg体重）的13cRA。卵巢石蜡切片计数显示：1 mg/kg和10 mg/kg剂量组显著降低原始卵泡数量（P<0.05），同时10 mg/kg组显著增加初级卵泡和黄体数量（P<0.05），表明13cRA能促进卵泡成熟和黄体形成。

Discussion

受实验经费和设施限制，本研究采用小鼠作为猪的替代模型。通过评估卵巢内不同阶段卵泡数量，可更清晰了解卵巢功能的重要信息，特别是卵泡发育与其调控因子的关系。本研究发现灌服10 mg/kg 13cRA显著减少原始卵泡数量，同时增加初级卵泡和黄体数量，说明13cRA能促进原始卵泡向初级卵泡转化，并加速卵泡成熟与黄体化进程。在猪卵巢颗粒细胞中，13cRA处理通过诱导G1-S期细胞周期转换显著促进增殖，并上调分化标志物LHR和PGR表达。功能实验证实CRABP2在介导13cRA效应中起核心作用——过表达CRABP2能增强13cRA诱导的LHR和PGR表达，而siRNA敲低则产生相反效果。进一步研究发现13cRA促进RARβ/RXRβ受体异源二聚体形成，药物激活该受体（使用阿达帕林）能增强分化标志物表达，受体敲低则抑制表达。视黄酸代谢调控研究显示，CRABP1和CYP26异构体（CYP26A1/CYP26B1）作为13cRA活性的功能性拮抗剂，该结论通过siRNA沉默或CYP26抑制剂R115866处理实验得以验证。值得注意的是，我们发现FoxA1作为颗粒细胞增殖与分化的负调控因子，通过siRNA转染和FoxA1重组蛋白处理实验证实其介导13cRA对颗粒细胞分化的影响。13cRA通过CRABP2依赖性核穿梭和RARβ/RXRβ受体激活抑制FoxA1表达，且CRABP1/CYP26系统组分（CYP26A1/CYP26B1）的联合调控显著改变FoxA1的调控动态。

Conclusion

本研究揭示视黄酸信号分子CRABP2能转运13cRA至细胞核，促进其与RARβ/RXRβ异源二聚体结合，通过抑制FoxA1表达发挥13cRA对猪卵巢颗粒细胞分化的促进作用，而CRABP1、CYP26A1和CYP26B1则通过视黄酸代谢途径削弱13cRA效应。这些新发现有助于拓展对13cRA调控哺乳动物卵巢功能的分子机制认知。