山羊痘病毒属成员交叉中和活性研究：基于LSDV ORF123单抗可变区cDNA测序与功能解析

本文首次采用HybSeq HT?二代测序技术对LSDV ORF123单抗可变区（VH/VL）进行测序，通过重组表达验证其CDR区对抗原识别的关键作用，并证实VH+VL共表达保留了对LSDV、GTPV和SPPV的交叉中和活性，为痘病毒广谱治疗性抗体设计提供重要参考。

　　

Section snippets

Cells, reagents, viruses, and virus infections

MDBK、Vero和293T细胞系在添加10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂条件下培养。分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞系使用含20% FBS的DMEM培养（Nulen, CF602）。所有细胞系经GMyc-PCR支原体检测试剂盒（YEASEN）检测结果为阴性。

Cloning and Sequencing of variable regions cDNA of the LSDV ORF123 mAb using next-generation sequencing (NGS)

通过传统杂交瘤技术获得靶向LSDV ORF123蛋白的单抗杂交瘤细胞系（^#1G1-1G12）（图1A、1B）。该单抗对GTPV和SPPV具有交叉反应性和中和活性（Ren S. et al., 2025）。为解析抗体可变区序列与表位识别的关系，采用HybSeq HT?二代测序技术对该单抗进行测序（图1C）。如图1D所示……

Discussion

山羊痘病毒属病原体严重制约地方畜牧业发展。本研究首次通过NGS测序获得LSDV ORF123单抗可变区序列，并证实其V_H与V_L共表达仍保持对LSDV、GTPV和SPPV的交叉结合与中和能力，深化了对痘病毒抗原相似性的认知。

Conclusion

本研究成功通过二代测序获得靶向LSDV ORF123蛋白的单抗V_H和V_L链序列。重组表达实验表明，共表达体系（V_H+V_L）保留了对LSDV、GTPV和SPPV的结合与中和活性，证实了合成抗体的功能完整性。进一步研究确认V_H和V_L的互补决定区（CDR1、CDR2、CDR3）是抗原-抗体识别的关键结构域。