基于实时荧光PCR（real-time PCR）技术检测饲料中青霉素发酵残留物的方法开发与应用

本研究针对饲料中非法添加青霉素菌渣等抗生素发酵残留物的突出问题，建立了一种特异性强、灵敏度高的实时荧光PCR（real-time PCR）检测方法。该方法以青霉素工业生产菌株特有的生物合成基因簇中orf70c基因为靶标，无需复杂前处理，两小时内即可完成检测，最低可检出0.5%的残留物含量，为饲料安全监管提供了高效可靠的技术手段。

　　

Highlight

本研究首次开发了针对饲料中青霉素发酵残留物的实时荧光PCR（real-time PCR）检测方法，通过特异性引物与探针的设计，实现了对九类饲料基质中0.5%（w/w）残留物的高精度检测。该方法操作简便、重现性良好（批间变异0.46–0.55%，批内变异0.37–0.69%），为抗生素残留监测提供了分子生物学层面的创新解决方案。

Materials and Reagents

实验材料包括来自国内兽用抗生素生产企业的青霉素发酵残留物及其他七种抗生素（如新霉素、阿普拉霉素、大环内酯类等）发酵副产物。饲料样本涵盖豆粕、棉籽粕、鸡粉等常见类型。DNA提取使用试剂盒（DNA Extraction Kit）完成，实时PCR反应体系包含特异性引物、TaqMan探针及预混液（Premix），所有操作均遵循标准分子生物学实验规范。

Specificity testing

实时PCR检测体系中引物与探针的特异性是确保结果准确的核心。本研究通过检测八类抗生素发酵残留物及空白饲料基质DNA，验证了引物探针组合仅对青霉素残留物产生特异性扩增信号，无交叉反应，表明该方法具备高度靶向识别能力。

Conclusion

本研究成功建立了以orf70c基因为靶标的实时PCR检测方法，可高效、特异地识别饲料中的青霉素发酵残留物。该方法流程简洁、检测快速，适用于常规监测场景，为解决饲料中抗生素残留非法添加问题提供了强有力的技术支撑，具有重要的推广应用价值。