月经周期对健康育龄女性下肢微血管功能及ERα、eNOS和p-eNOS蛋白表达的影响：一项机制探索研究

本研究系统探讨了月经周期中卵泡早期（EF）与卵泡晚期（LF）的雌激素波动对下肢微血管功能及雌激素受体α（ERα）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）及其磷酸化形式（p-eNOS）蛋白表达的影响。通过被动腿部运动（PLM）评估微血管功能，并结合骨骼肌活检的免疫印迹与免疫荧光分析，研究发现尽管群体水平上月经周期相位变化未显著影响功能与蛋白表达，但个体水平的雌二醇（E2）浓度和eNOS/p-eNOS蛋白与微血管功能呈正相关，提示个体化激素与蛋白定量比周期相位更能反映微血管功能状态，为女性心血管研究提供了重要方法学依据。

　　

引言

雌激素是主要的女性性激素，其中17β-雌二醇（E2）是育龄女性中最具活性和普遍存在的形式。月经周期中E2存在自然波动，卵泡早期（EF）以低E2水平为特征，而卵泡晚期（LF）则表现为高E2水平。已有证据支持E2对血管功能具有有益影响，这主要归因于E2介导的内皮源性血管舒张剂一氧化氮（NO）的生物利用度增加。早期研究报道，与EF期相比，LF期的传导血管和微血管内皮功能有所改善，这些发现影响了当前的方法学指南，建议在月经周期的标准化阶段（理想情况下为EF期，第1-7天）评估育龄女性的内皮功能。然而，最近多项研究和数据综合表明，月经周期各阶段的内皮功能在群体水平上并未发生变化，进一步检查个体参与者反应发现，相位对内皮功能的影响存在显著的个体间异质性。因此，尽管存在根深蒂固的共识，但现在有证据表明月经相位对内皮功能的影响存在显著变异性。目前，导致研究和个体水平上月经相位对内皮功能影响变异性的机制仍未知。

腿部血流（LBF）对被动腿部运动（PLM）的反应是评估下肢外周微血管功能的一种方法，主要由内皮源性血管舒张剂NO介导。两项研究报告称，月经周期的EF和LF阶段之间，PLM的充血反应在群体水平上没有差异。尽管这些论文未进行个体应答者分析，但腿部血流随相位的变化存在显著变异性，表明在某些女性中，周期性激素暴露可能存在影响。月经周期中E2浓度与PLM的LBF反应并不一致相关。多项研究还报告称，月经周期中通过血流介导的扩张（FMD）评估的传导动脉内皮功能与E2无关。因此，月经相位对外周血管功能影响的变异性可能不仅仅是E2相位变化的结果，而可能与影响血管功能的下游蛋白质变化更好地相关。

循环E2与雌激素受体亚组α（ERα）结合并增加其蛋白质含量，导致内皮一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（p-eNOS）水平增加。这种雌激素介导的信号通路已在动物和人类模型中被观察到，并被认为介导了雌二醇、NO生物利用度和血管功能之间的正相关关系。Gavin等人评估了EF和LF阶段肘静脉内皮细胞中的ERα蛋白水平，发现LF阶段的ERα蛋白水平显著更高，模仿了LF阶段FMD的上升。ERα蛋白含量也与eNOS和p-eNOS蛋白相关。如果E2对内皮功能的影响是由E2对ERα、eNOS和p-eNOS的影响决定的，那么可以合理推测，相位对内皮功能影响的个体间变异性可能由相位对ERα、eNOS和p-eNOS水平影响的个体间变异性解释。

为了评估ERα含量和受体结合的下游行动对相位内皮功能变化的影响，必须在同一血管床中量化内皮功能和蛋白质含量。股四头肌中NO依赖性微血管功能可以通过PLM的LBF反应来量化。在股四头肌中评估内皮功能是理想的，因为该肌肉群也是进行肌肉活检的常见部位。骨骼肌微血管的ERα、eNOS和p-eNOS水平可以通过分析从股外侧肌收集的肌肉活检来测量。

本研究的目的为：1）确定EF到LF E2波动对股四头肌ERα、eNOS和p-eNOS蛋白水平以及通过PLM的LBF反应评估的外周微血管功能的群体水平影响；2）确定微血管功能的相位变化是否与ERα、eNOS和p-eNOS蛋白的相位变化相关。我们假设：1）微血管功能和蛋白质含量在群体水平上没有差异；2）在个体水平上，蛋白质含量与微血管功能相关，因此那些PLM诱导的充血增加更大（表明微血管功能改善）的个体在从EF到LF阶段也表现出ERα、eNOS和p-eNOS的更大增加。

本研究首次提供了月经周期中微血管功能和E2相关蛋白质含量的并行测量。这促进了我们对驱动月经相位和血管功能变异性机制的理解。由于对月经周期生理变异性的担忧仍然是女性参与心血管研究的障碍，因此必须推进我们对驱动月经周期相关血管功能变化机制的理解，以改进方法学指南并对抗历史上女性的代表性不足。

方法

伦理批准

所有实验程序均经女王大学健康科学与附属教学医院研究伦理委员会批准，该委员会符合最新修订的《赫尔辛基宣言》标准（但本研究未在数据库中注册）。伦理批准参考编号为6004461。志愿者在参与当前研究前提供了经同一委员会批准的书面知情同意书。

参与者和筛查访问

招募了33名年轻育龄女性参与本研究（18-28岁）。7名参与者在研究开始前因COVID-19（n=6）或时间承诺（n=1）退出。由于超声速度数据质量差（n=1）或错过LF阶段访问（n=2），三名参与者的数据被丢弃。23名参与者完成了两次实验访问。6名参与者拒绝肌肉活检；因此，一部分参与者（n=17）完成了血管测量和肌肉活检。参与者自然月经，未使用激素避孕药（如口服避孕药），且月经周期规律（每年≥10个周期）。符合本研究条件的参与者血压为90-140 mmHg/60-90 mmHg，体重指数（BMI）<30 kg/m²，报告无心血管疾病或妇科疾病史，每周娱乐活动≤5小时运动，并确认为非吸烟者。在数据收集前进行了筛查访问，包括医学筛查问卷、身高和体重测量以及自动血压评估，以确保参与者符合这些标准。在此期间，参与者熟悉了实验方案，并使用双功超声评估了股总动脉（CFA），以确保可以获得清晰的图像和血流速度信号。

实验设计

每名参与者完成了两次相同的实验访问，一次在月经周期的EF阶段，一次在LF阶段。EF阶段访问发生在月经开始后2-6天。LF阶段访问安排在参与者周期预测最后一天前约15天。这旨在落在预期排卵前一天。LF阶段通过排卵测试（Clearblue Advanced Digital Ovulation Test）确认。该排卵测试检测两种关键激素：雌酮-3-葡萄糖醛酸苷（E3G；雌二醇的尿液代谢物）和黄体生成素（LH）。由于峰值E2水平恰好发生在排卵前，1）如果到LF访问日期时排卵测试未检测到尿液E3G升高，则推迟该访问直至检测到；2）如果排卵（LH激增）发生在计划的LF访问之前，则将该访问重新安排到下一个周期或不收集。

每次实验访问前，参与者禁食12小时，禁咖啡因和酒精24小时，禁运动48小时。两次访问在一天中的同一时间（彼此相差±2小时）进行，以防止内皮功能的昼夜变化。实验访问开始于20分钟的休息期，期间采集唾液样本以评估E2浓度。唾液样本存储在-80°C冰箱中，直到未来分析完成。进行了五次PLM试验，每次试验之间至少休息10分钟，或直到血流速度和直径恢复到基线。随后在最后一次PLM试验后至少30分钟从股外侧肌进行肌肉活检。PLM试验和肌肉活检在左腿进行。

实验程序

心率和血压

使用三导联心电图（ECG）连续监测心率（HR，以次/分钟计）。使用自动血压计（BpTRU BPM-100；BpTRU Medical Devices）测量五次血压并取平均值（第一次测量丢弃）。在每个休息期结束时，即PLM试验前测量血压。在PLM试验期间，使用自动血压指套（Finometer PRO, Finapres Medical Systems, Amsterdam, The Netherlands）连续监测血压。连续的HR和BP信号记录在LabChart（ADInstruments, Colorado Springs, CO）中。

股总动脉直径和速度测量

使用B模式二维超声（12 MHz；Vivid i2；GE Medical Systems, Mississauga, Canada）以68°的入射角捕获CFA的直径测量，如先前所述。超声图像通过视频图形阵列（VGA）到通用串行总线（USB）帧抓取器（Epiphan Systems Inc., Ottawa, Canada）记录，并使用Camtasia Studio（TechSmith, Okemos, MI）保存为音频视频交错（AVI）文件，如Jazuli和Pyke先前所述。使用多普勒超声以4 MHz（Vivid i2；GE Medical Systems）和68°的入射角测量CFA的血流速度。Multigon 500 P TCD（Multigon Industries, Yonkers, NY）处理来自超声的血流速度信号，并用于确定平均血流速度，并记录在LabChart（ADInstruments, Colorado Springs, CO）中供未来分析。

腿部微血管功能—PLM血流动力学反应

如参考文献中所述进行PLM。参与者处于坐姿，略微倾斜约110°，以便更好地进入腹股沟区域。使用膝支具将腿从180°伸展被动移动到90°屈曲，以确保精确的运动范围。从180°来回移动被认为是一个周期，参与者的腿以每秒一个周期的速度移动。在PLM期间，通过双功超声测量CFA的血流速度和直径。每次PLM试验包括1分钟基线、2分钟PLM和2分钟恢复。PLM测量表示为每次访问五次试验的平均值。在一部分参与者（n=17）中获取大腿体积，并使用大腿长度、三个大腿围度和皮褶测量来量化，如先前所述。由于大腿体积（L）已知调节PLM的LBF反应，PLM血流动力学反应还表示为标准化到大腿体积的值。

肌肉活检

肌肉活检的程序先前由Edgett等人描述。使用经皮肌肉活检技术从股外侧肌外侧部分取肌肉活检。一部分提取的肌肉组织在液氮中快速冷冻用于免疫印迹。肌肉组织的另一部分嵌入Tissue-Teck OCT化合物（No. 4583, Sakura Finetek, Torrance, CA）中，并在液氮冷却的异戊烷中冷冻。样本存储在-80°C直到分析完成。

数据分析

雌二醇分析

通过分析唾液样本评估17β-雌二醇水平，按照制造商说明（Salimetrics 17β-Estradiol Enzyme Immunoassay Kit, State College, PA）。使用比色双辛可宁酸测定（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）确定唾液样本的总蛋白浓度。

股总动脉直径和血流速度

由一名对实验条件（相位）盲法的观察者（LL）进行直径分析。使用自动边缘跟踪软件（Encoder FMD and Bloodflow v. 3.0.3, Reed Electronics, Perth, WA, Australia）分析CFA直径，如先前对肱动脉所述。逐帧直径编译成3秒的区间。使用LabChart Software以3秒时间区间分析血流速度，如先前所述。这些测量允许计算主要结果变量，腿部血流量（LBF）和血管导纳（LVC），如先前所述。简要地，LBF（mL/min）计算为速度和时间区间的直径的乘积[LBF = π(直径/2)² × 速度]。LVC（mL/min/mmHg）通过将LBF除以平均动脉压（MAP; mmHg）计算（LVC = BF/MAP）。通过从基线到峰值的变化（Δpeak）和基线以上的曲线下面积（AUC）评估对PLM的反应。

ERα、eNOS和p-eNOS蛋白含量

将人骨骼肌组织的10 μm连续切片安装在玻璃显微镜载玻片上。简要地，对于免疫荧光分析，切片在室温下用4%甲醛在1× PBS溶液中固定10分钟，然后在PBS溶液中用0.1% Triton X-100渗透10分钟。为了减少非特异性结合，样品在含有0.1% Triton X-100溶液的2.5%牛血清白蛋白封闭溶液中孵育30分钟。然后样品在4°C下与各自浓度在封闭溶液中的一抗孵育过夜。样品用针对抗肌萎缩蛋白（MANDYS1-3B7）和胶原蛋白IV（M3F7）（来自Developmental Studies Hybridoma Bank）、eNOS/NOS Type III（610296；BD Transduction Laboratories）和p-eNOS（9571S；Cell Signaling Technology）的一抗免疫染色，然后使用来自Thermo Fisher Scientific（A21140、A21121和A21137）和Santa Cruz Biotechnology（sc-2091）的同型特异性荧光二抗。切片与同型匹配的二抗孵育，然后用Fluoromount-G（00-4958-02；Thermo Fisher Scientific）试剂和显微镜盖玻片封片。

使用Axio Observer Z1显微镜（Carl Zeiss），在整个肌肉横截面上拍摄的单个图像上量化荧光，并使用Zen 3.5软件（Carl Zeiss）组装成合成图像。选择和分析编译图像中的感兴趣区域（ROI）。使用ImageJ（National Institutes of Health）进行eNOS和p-eNOS荧光的量化，如先前所述，以确定它们相对于ROI内阳性染色区域的蛋白含量。对合并的eNOS和p-eNOS信号与胶原蛋白IV信号进行视觉检查，以确定eNOS和p-eNOS在毛细血管中的定位。两名参与者在活检期间没有提取足够的肌肉来安装组织进行免疫荧光分析。eNOS染色质量差导致另外一名参与者从eNOS免疫荧光蛋白数据中排除。因此，总共有14名参与者被纳入eNOS蛋白数据，15名参与者被纳入p-eNOS数据。

如先前所述使用全肌肉匀浆进行免疫印迹。简要地，肌肉样本在含有蛋白酶抑制剂（Roche Applied Sciences, 04693116001）的冰冷缓冲液中裂解。等量蛋白质作为单一样品上样，并使用8%–12% SDS-PAGE分离，然后转移到PVDF膜（Bio-Rad Laboratories）上。膜在室温下用含有Tween-20的Tris缓冲盐水（TBS-T）中的2.5%脱脂奶粉封闭1小时，然后在4°C下与以下一抗探测过夜：ERα（PCRP-ESR1-1A12-S；Developmental Studies Hybridoma Bank）、eNOS（610296；BD Transduction Laboratories）、p-eNOS（9571S；Cell Signaling Technology）和GAPDH（2118S；Cell Signaling Technology）。膜在室温下与适当的辣根过氧化物酶偶联二抗孵育1小时。使用增强化学发光（ECL）免疫印迹底物在ChemiDoc Imaging System（Bio-Rad）上可视化蛋白条带。进行肌肉分析的研究人员对相位盲法。在每个凝胶上单独使用GAPDH作为加载对照，相位之间没有差异（P > 0.05）。所有蛋白数据相对于GAPDH表达。

统计分析

使用SPSS Version 25（IBM Corp., Armonk, NY）和GraphPad Prism Version 10.1.1（GraphPad Software, Boston, MA）进行统计分析。值表示为平均值±标准差（SD）。统计显著性设定为P < 0.05。基于先前工作，确定16名参与者的样本量允许检测ERα蛋白的差异，估计EF和LF阶段之间的效应大小为0.75。使用G*Power version 3.1.9.4计算样本量，显著性水平为0.05，效能水平为0.8。

使用配对t检验评估相位（EF与LF）对基线变量、腿部血管导纳和血流量（两者的Δpeak和AUC）以及EF和LF阶段蛋白水平（eNOS、p-eNOS和ERα）的影响。进行双变量相关分析以检查PLM的LBF反应与蛋白含量（eNOS、p-eNOS和ERα）之间的关系，包括EF和LF阶段的数据。还使用双变量相关评估E2与PLM的LBF反应之间以及E2与蛋白质之间的关系。还进行了PLM反应和蛋白质以及E2的相位变化分数（LF-EF）之间的双变量相关。所有与PLM反应的相关均使用和未使用标准化到大腿体积的PLM反应进行。使用Cook距离值识别异常值。

相位变化分数（LF-EF）之间没有相关性是显著的，并在补充表S1中报告。因此，文章中报告的所有相关分析均源自将EF阶段和LF阶段数据作为单独点包含在相关中。研究表和图中血管功能数据的所有相关均呈现为标准化到大腿体积的PLM LBF AUC和Δpeak值。由于大腿体积仅在一部分参与者中收集，因此有五名参与者进行了肌肉活检但没有大腿体积测量。因此，蛋白质含量与调整到大腿体积的PLM LBF反应之间相关的样本量比组数据少五名参与者。使用未校正PLM数据的相关分析在补充表S1（变化分数；LF-EF）和补充表S2（包括EF和LF数据）中呈现。相关强度分类如下：非常强r > 0.80；强r = 0.60–0.79；中等r = 0.40–0.59；弱r = 0.20–0.39；非常弱r < 0.19。

结果

参与者特征

参与者年龄为21±3岁，BMI为23.3±1.99 kg/m²，大腿体积为5.96±0.94 L。参与者的平均周期长度为29±3天。EF访问发生在第4±1天，LF访问发生在第14±4天。七名参与者未检测到排卵。EF和LF阶段访问期间的平均7天PAR-Q得分分别为233.3±7.5和230.8±6.7 kcal/kg/wk（P = 0.141）。

基线血流动力学变量

EF和LF访问之间基线HR没有变化（P = 0.844）。与EF阶段相比，LF阶段的基线MAP和收缩压显著较低（2和3 mmHg；P < 0.05）。舒张压在阶段之间没有显著差异。LF阶段CFA的基线直径更大（0.009 mm ± 0.003，P < 0.05）。基线LBF和LVC在阶段之间保持不变（P > 0.05）。平均基线血流动力学数据呈现在表1中。

唾液雌二醇

月经周期LF阶段的E2显著高于EF阶段（P = 0.002；图1）。E2标准化总蛋白含量后，相位的显著效应仍然存在（P = 0.002）。四名个体在LF阶段访问时数值上E2较低。当排除这四名参与者时，群体水平观察到的微血管功能和蛋白质含量的结果没有变化（数据未显示）。

腿部微血管功能—PLM的血流动力学反应

EF和LF阶段之间以LBF AUC（P = 0.252）和LBF Δpeak（P = 0.477）表征的PLM血流动力学反应没有显著差异（图2）。当PLM反应标准化到大腿体积时，也没有相位效应（LBF AUC，P = 0.755；LBF Δpeak，P = 0.637）。当PLM反应表征为LVC AUC（EF = 1.78 ± 1.27 mL/min/mmHg，LF = 1.88 ± 1.19 mL/min/mmHg；P = 0.483）或LVC Δpeak（EF = 5.28 ± 2.82 mL/min/mmHg，LF = 5.55 ± 2.58 mL/min/mmHg；P = 0.442）时，也没有相位效应。PLM期间的ΔMAP在EF阶段比LF阶段更大（EF = ?11 ± 6 mmHg，LF = ?2 ± 6 mmHg；P < 0.001）。E2与LBF AUC/大腿体积（图3A）和E2与LBF Δpeak/大腿体积（图3B）之间存在显著正相关，分别具有弱和中等强度关系。E2与表征为LVC AUC/大腿体积（r = 0.363；P = 0.048）和LVC Δpeak/大腿体积（r = 0.634；P < 0.001）的PLM反应的相关分别为弱和强。有趣的是，体力活动（kcal/kg/wk）与被动腿部运动反应LBF AUC/大腿体积（r = 0.518；P = 0.002；一个异常值移除）和LBF Δpeak/大腿体积（r = 0.356；P = 0.042；一个异常值移除）呈弱到中等相关；然而，LVC AUC/大腿体积（r = 0.340；P = 0.053）和LVC Δpeak/大腿体积（r = 0.223；P = 0.212）与体力活动的相关均较弱且未达到显著性。

eNOS、p-eNOS和ERα免疫印迹分析

通过免疫印迹分析测量的骨骼肌eNOS、p-eNOS和ERα蛋白的平均组水平显示在图4，A-C中。从EF到LF阶段，eNOS（P = 0.722）、p-eNOS（P = 0.079）或ERα（P = 0.182）蛋白没有显著差异。EF和LF阶段之间p-eNOS/eNOS的比率也没有差异[EF = 1.23 ± 1.32，LF = 0.79 ± 0.59任意单位（AU）；P = 0.208]。E2与ERα（r = ?0.118，P = 0.506）、eNOS（r = ?0.214，P = 0.225）或p-eNOS（r = ?0.047，P = 0.792）之间没有关系。ERα与eNOS之间存在显著正相关（r = 0.352，P = 0.048；两个异常值移除），但与p-eNOS无关（r = 0.317，P = 0.073；一个异常值移除），两个关系均较弱。eNOS与p-eNOS之间没有关系（r = ?0.176，P = 0.327）。

eNOS、p-eNOS和ERα免疫荧光分析

通过免疫荧光分析测量的平均组eNOS和p-eNOS蛋白显示在图5，A和B中。月经阶段之间eNOS（P = 0.610）和p-eNOS（P = 0.510）水平没有显著差异。eNOS和p-eNOS缺乏相位差异在代表性图像中 demonstrated（图5C）。合并的eNOS和胶原蛋白IV信号的视觉检查表明eNOS和p-eNOS强烈定位到毛细血管（图5D）。E2浓度与eNOS（r = 0.151，P = 0.444）或p-eNOS（r = 0.119，P = 0.533）之间没有关系。通过免疫荧光评估的eNOS蛋白与通过免疫印迹评估的eNOS蛋白中等相关（r = 0.589，P = 0.010）。

蛋白质含量和血管功能

免疫印迹分析

蛋白质水平与PLM的LBF反应之间的相关显示在图6中。eNOS水平与LBF AUC（P < 0.01；图6C）和LBF Δpeak（P < 0.001；图6D）之间存在显著正相关，分别具有中等和强强度。ERα和p-eNOS水平与LBF AUC和LBF Δpeak无关（P > 0.05；图6，A、B、E和F）。这些结果与LVC AUC和LVC Δpeak没有变化（表2）。

免疫荧光分析

eNOS荧光与LBF AUC之间存在显著强正相关（P < 0.01；图6G），eNOS荧光与LBF Δpeak之间存在中等正相关趋势 toward significance（r = 0.458，P = 0.056；图6H）。p-eNOS荧光也与LBF AUC（P < 0.05；图6I）和LBF Δpeak（P < 0.01；图6J）正相关，两者关系强度中等。这些结果与LVC AUC和LVC Δpeak相似，例外的是eNOS荧光与LVC Δpeak之间的正相关达到显著性（表2）。

讨论

本研究首次比较了月经周期中下肢微血管功能的并行测量和来自骨骼肌样本的ERα、eNOS和p-eNOS的体内蛋白水平。结果提供了关于雌激素相关蛋白质在全骨骼肌和定位到骨骼肌微血管中对通过PLM的LBF反应评估的功能性血管结果的作用的新见解。本研究的主要发现如下：1）当PLM反应表征为LBF AUC或LBF Δpeak时，月经相位对腿部微血管功能没有影响，尽管E2与这些变量之间存在正相关；2）使用免疫印迹（全肌肉样本）分析时，月经相位对ERα、eNOS和p-eNOS蛋白水平没有影响，或使用免疫荧光（定位到微血管）分析时，对eNOS和p-eNOS蛋白水平没有影响；3）通过免疫印迹分析的eNOS蛋白水平，以及通过免疫荧光分析的eNOS和p-eNOS蛋白与微血管功能正相关，如PLM的血流动力学反应所示。总体而言，本研究提供了新的证据，表明骨骼肌微血管中的eNOS和p-eNOS蛋白与育龄女性的外周微血管功能之间存在潜在的机制联系。尽管月经相位对腿部微血管功能或蛋白表达的群体水平效应缺乏，但相关水平的这种关系仍然存在。结果支持eNOS和p-eNOS蛋白在解释育龄女性微血管功能的个体间变异性中的作用，而这些因素在EF和LF月经阶段之间的群体水平变化有限。

月经相位和外周微血管功能

PLM导致快速充血反应，主要反映外周微血管的扩张。PLM的LBF反应60%–80%由内皮源性血管舒张剂NO介导。E2被认为通过增加NO生物利用度来介导内皮功能。此外，PLM的血流动力学反应是评估年轻女性血管功能的可靠方法。这使得NO介导的PLM LBF反应成为评估育龄女性月经周期血管功能的合适测量。

月经相位对宏观血管和微血管内皮功能影响的早期报告表明，与EF阶段相比，LF阶段的功能更高。由于这些原因，方法学指南指示在评估育龄女性内皮功能时应控制月经相位。相反，我们当前研究的结果表明，尽管LF阶段E2在群体水平上升高，但月经周期的EF和LF阶段之间以LBF AUC或LBF Δpeak表征的PLM充血反应没有差异。这些发现与先前报告PLM的LBF反应在EF和LF阶段之间没有变化的研究一致，并与最近的荟萃分析一致，该分析观察到宏观血管内皮功能在LF阶段增加的“非常低”确定性证据，而微血管内皮功能没有观察到相位效应。我们的结果有助于越来越多的文献表明月经周期中EF到LF阶段转变对外周微血管功能没有群体水平影响。

在个体水平上，E2波动存在显著变异性， evidenced by 四名参与者在LF阶段数值上E2低于EF阶段。LBF AUC（r =