数字PCR技术建立PIK3CA H1047R突变检测参考方法及标准物质的创新研究

本研究针对PIK3CA H1047R突变检测缺乏标准化参考体系的问题，开发了基于数字PCR（dPCR）的参考测量程序（RMP）和基因组参考物质（RM）。该方法在0.2%-40%突变频率范围内线性优异（R2=0.9999），检测限达0.38%突变丰度。RM稳定性达16个月（-80℃），参考值为(7.02±0.37)×103 copies/μL（突变型）和49.75%±1.69%（丰度）。成功用于试剂盒性能验证，为肿瘤基因检测质量控制提供关键技术支撑。

　　

PIK3CA基因突变已成为多种人类癌症（尤其是乳腺癌）的重要预测指标。随着非侵入性检测方法的快速发展，临床实践中却因缺乏参考测量程序（Reference Measurement Procedure, RMP）和参考物质（Reference Material, RM）而面临结果一致性与可比性的挑战。本研究成功建立基于数字PCR（digital PCR, dPCR）的潜在RMP方法，并研制出针对PIK3CA H1047R突变的基因组DNA参考物质。

该参考方法在突变频率0.2%至40%范围内表现出卓越的线性关系（斜率=1.0078，R²=0.9999），对H1047R突变的检测灵敏度达到2.9拷贝/μL（对应0.38%突变丰度）。所开发的基因组RM通过均匀性和稳定性验证，证实其在-80°C条件下可稳定保存16个月。采用建立的RMP对RM进行定值，测得H1047R突变型拷贝数浓度为(7.02±0.37)×10³拷贝/μL，野生型为(7.09±0.37)×10³拷贝/μL，突变丰度为49.75%±1.69%。

利用该RM对三种检测试剂盒进行性能评估，发现其中一款试剂盒的检测限与宣称指标存在显著差异。研究表明，该基因组RM可为PIK3CA H1047R检测方法的性能优化和质量控制提供关键技术支持。