LINC00886通过miR-423-5p/TLR4/Myd88/NF-κB/PD-L1通路介导卵巢癌恶性进展与免疫逃逸的机制研究

本研究针对卵巢癌治疗预后差、免疫逃逸机制不明的问题，通过探讨LINC00886/miR-423-5p/TLR4轴在卵巢癌恶性行为及免疫微环境调控中的作用，发现LINC00886通过ceRNA机制吸附miR-423-5p解除其对TLR4的抑制，激活TLR4/Myd88/NF-κB通路促进PD-L1表达，诱导CD8+T细胞凋亡和免疫逃逸。该研究为卵巢癌提供了新的预后标志物和免疫治疗靶点。

　　

卵巢癌作为女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，因其早期症状隐匿、诊断时多为晚期，导致患者预后极差，五年生存率低且复发率高。尽管靶向治疗和免疫治疗取得了一定进展，但其疗效仍需提升。因此，深入探索卵巢癌发生发展的分子机制，寻找新的预后标志物和治疗靶点，对改善患者生存具有重要意义。

长链非编码RNA（long non-coding RNAs, lncRNAs）在基因表达调控、细胞分化和疾病进展中扮演关键角色。它们可作为竞争性内源RNA（competing endogenous RNAs, ceRNAs），通过吸附微小RNA（microRNAs, miRNAs）调控下游靶基因表达，影响肿瘤细胞行为。近年来，多个lncRNAs如LINC00665、LINC01123等被证实通过ceRNA机制参与卵巢癌进展，但LINC00886在卵巢癌中的作用尚不明确。与此同时，miR-423-5p在多种肿瘤中表现出抑癌作用，但其与LINC00886的交互作用在卵巢癌中未见深入探讨。

本研究旨在揭示LINC00886在卵巢癌中的临床意义及其通过miR-423-5p/TLR4/Myd88/NF-κB/PD-L1通路调控卵巢癌恶性行为和免疫逃逸的机制，为卵巢癌的分子靶向治疗提供新思路。

本研究主要采用以下关键技术方法：1）使用RT-qPCR检测LINC00886、miR-423-5p和TLR4在106对卵巢癌组织及细胞系中的表达；2）通过CCK-8、Transwell和Annexin V-FITC/PI流式细胞术分析基因调控对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响；3）利用RNA免疫共沉淀（RIP）和双荧光素酶报告基因实验验证LINC00886、miR-423-5p与TLR4之间的直接结合关系；4）采用蛋白质印迹（Western blot）分析TLR4/Myd88/NF-κB/PD-L1通路蛋白表达；5）通过ELISA和流式细胞术检测CD8⁺T细胞凋亡及细胞因子TNF-α和IFN-γ水平。

LINC00886在卵巢癌组织中高表达且与不良预后相关

通过GEPIA数据库和临床样本验证，发现LINC00886在卵巢癌组织和细胞系中显著上调（P<0.0001）。其高表达与淋巴结转移、腹水细胞学阳性、FIGO分期晚等临床病理特征显著相关（P<0.05）。多因素Cox回归分析显示，LINC00886高表达是卵巢癌患者预后的独立危险因素（HR=3.624, P=0.007）。Kaplan-Meier生存曲线进一步证实，LINC00886高表达患者总生存期显著缩短（Log-rank P=0.002）。

LINC00886调控卵巢癌细胞的恶性行为

在卵巢癌细胞系中敲低LINC00886后，细胞增殖、侵袭能力显著抑制（P<0.0001），凋亡率显著增加（P<0.0001）。同时，促凋亡基因Bax表达上调，抗凋亡基因Bcl-2表达下调，表明LINC00886通过调控凋亡相关基因促进卵巢癌进展。

LINC00886通过吸附miR-423-5p发挥调控作用

miR-423-5p在卵巢癌组织和细胞系中低表达，与LINC00886表达呈负相关（r=-0.641, P<0.001）。RIP实验证实LINC00886与miR-423-5p在Ago2蛋白复合物中结合，双荧光素酶报告实验显示miR-423-5p mimics可抑制野生型LINC00886报告基因活性（P<0.0001），突变结合位点后此效应消失，证实两者存在特异性结合。功能实验表明，抑制miR-423-5p可逆转LINC00886敲低对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用。

miR-423-5p靶向调控TLR4表达

通过生物信息学分析和实验验证，发现TLR4是miR-423-5p的直接靶基因。TLR4在卵巢癌中高表达，与LINC00886正相关（r=0.624, P<0.001），与miR-423-5p负相关（r=-0.633, P<0.001）。双荧光素酶报告实验和RIP实验证实miR-423-5p与TLR4 3'UTR结合并抑制其表达。过表达TLR4可部分逆转miR-423-5p对卵巢癌细胞增殖、侵袭的抑制和凋亡的促进作用。

LINC00886/miR-423-5p/TLR4轴调控PD-L1表达及免疫逃逸

Western blot结果显示，敲低LINC00886可抑制TLR4、Myd88、p-NF-κB p65和PD-L1蛋白表达，而过表达TLR4可逆转此效应。在Transwell共培养体系中，敲低LINC00886后，CD8⁺T细胞凋亡率降低，TNF-α和IFN-γ水平升高，表明肿瘤细胞免疫逃逸能力减弱。这些结果提示LINC00886通过miR-423-5p/TLR4轴激活NF-κB通路，上调PD-L1表达，促进免疫逃逸。

LINC00886/miR-423-5p/TLR4轴调控自噬和凋亡

Western blot检测发现，敲低LINC00886可降低自噬标志物LC3-II和凋亡标志物cleaved-caspase-3表达，同时敲低miR-423-5p可逆转此效应。过表达TLR4也可部分逆转miR-423-5p过表达对自噬和凋活的抑制作用，表明该轴同时调控卵巢癌细胞的自噬和凋亡过程。

本研究首次系统阐明了LINC00886在卵巢癌中的致癌作用及其分子机制。LINC00886通过ceRNA机制吸附miR-423-5p，解除其对TLR4的抑制，激活TLR4/Myd88/NF-κB信号通路，上调PD-L1表达，促进卵巢癌细胞增殖、侵袭、抑制凋亡，并诱导免疫逃逸。此外，该轴还调控细胞自噬过程，进一步促进肿瘤恶性进展。

这些发现不仅揭示了LINC00886作为卵巢癌预后生物标志物的潜力，还为开发靶向LINC00886/miR-423-5p/TLR4轴的免疫治疗策略提供了理论依据。通过抑制LINC00886或恢复miR-423-5p表达，可能逆转肿瘤免疫抑制微环境，增强CD8⁺T细胞抗肿瘤活性，从而改善卵巢癌患者预后。

该研究于2025年发表在《Hereditas》杂志，为卵巢癌的精准治疗提供了新的方向。未来的研究可进一步探索靶向这一通路的抑制剂在临床中的应用价值，以及其与其他治疗手段的联合效应。