基于微型化中心复合设计的绿色RPLC方法在评估甲硝唑和阿苯达唑保留行为中的应用：优化及理化常数研究

《CHROMATOGRAPHIA》：Application of a Miniaturized Central Composite Design-Based Green RPLC Method in Evaluating the Retention Behavior of Metronidazole and Albendazole: The Optimization and Physicochemical Constants

双甲硝唑和左苯达唑在微型绿色反相色谱中通过中心复合设计优化甲醇/乙醇浓度、流动相pH及柱温，确定最佳条件（乙醇-水9.5%、pH4.5、37℃），方法符合ICH Q2(R1)规范并成功应用于药片制备，同时通过CCD模型估算解离常数（pKa）及热力学参数（ΔH?、ΔS?、ΔG?），结果与有毒溶剂方法一致。

　　

摘要

本研究采用基于中心复合设计（CCD）的微型绿色反相液相色谱（green RPLC）方法，探讨了乙醇/甲醇浓度、流动相pH值和柱温等参数对甲硝唑和阿苯达唑保留行为的影响。通过评估这些参数的多种效应，确定了这些化合物同时测定的最佳液相色谱分离条件。同时，也单独分析了这些参数对化合物的个体影响，以获得一些物理化学常数（如解离常数和热力学常数）。通过使用CCD和Derringer的理想函数，找出了最优的色谱条件。最佳分析条件为：乙醇-水混合物中乙醇含量为9.5%（体积比），pH值调至4.5；甲醇-水混合物中甲醇含量为10%，pH值调至4.5。在两种有机水混合物中，均选用Supelco Ascentis RP Amide（150 × 4.6 mm，内径2.7 μm）色谱柱进行化合物测定。柱温保持恒定在37°C。所开发的方法用于同时测定这两种化合物，其相关系数为0.999，在0.5–3.0 μg/mL的浓度范围内表现出线性，且在乙醇-水有机混合物中具有可接受的灵敏度和准确度，从而缩短了分离时间。该方法根据ICH Q2（R1）指南进行了验证，并成功应用于甲硝唑片剂的制备。化合物的解离常数（pKa）和热力学参数（ΔH°、ΔS°和ΔG°）是通过CCD得到的方程在选定参数范围内估算的。本研究获得的数据与其他使用更具毒性的溶剂进行的分析方法得到的pKa值一致。