靶向结核分枝杆菌关键抗原LAM、EspB与Mtb8的新型多克隆抗体制备及诊断应用研究

本研究针对结核病诊断与病原体研究的抗原识别工具短缺问题，开发了针对结核分枝杆菌细胞壁关键成分LAM、EspB和Mtb8的高特异性多克隆抗体。研究人员通过兔免疫与亲和纯化技术成功获得三种抗体，验证了其在多种分枝杆菌中的广谱反应性及在夹心ELISA中的诊断潜力，为结核病精准诊断和病原机制研究提供了新型工具。

　　

结核病（Tuberculosis, TB）至今仍是全球最致命的传染病之一，每年导致超过百万人死亡。其病原体结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）凭借独特的细胞壁结构抵御药物侵入，同时通过分泌系统操纵宿主免疫反应，造成持续感染与耐药性蔓延。尽管脂阿拉伯甘露聚糖（Lipoarabinomannan, LAM）已被用作尿检诊断标志物，但针对其及其他关键抗原（如EspB和Mtb8）的高质量抗体工具仍稀缺，限制了对病原体生物学和宿主互作机制的深入探索。

为此，研究人员在《Applied Microbiology and Biotechnology》发表了一项研究，致力于开发并系统评估针对Mtb H37Rv细胞壁成分LAM、EspB和Mtb8的新型兔源多克隆抗体（pAbs），以提升结核病诊断和研究工具的性能。

研究采用的关键技术方法包括：以Mtb H37Rv细胞壁免疫家兔获得多抗血清，通过亲和层析分别纯化LAM、EspB和Mtb8特异性抗体；利用间接ELISA、Western blot和流式细胞术评估抗体特异性、灵敏度及结合活性；使用夹心ELISA测试LAM pAb作为捕获抗体的诊断性能；所用分枝菌株及肺炎病原体样本来源于中国疾控中心和北京胸科医院。

LAM pAb性能指标

研究显示，免疫血清仅对LAM、EspB和Mtb8有特异性反应。经纯化后，LAM pAb在ELISA和Western blot中均表现出对LAM的高特异性和1 ng/mL的检测灵敏度。

EspB pAb反应性评估

EspB pAb可识别重组EspB蛋白，灵敏度达100 ng/mL，并在Western blot中验证其对全长EspB（存在于菌体裂解液和细胞壁组分）和成熟分泌型EspB（存在于培养上清）的双重识别能力。

Mtb8 pAb免疫反应验证

该抗体可检测重组和内源Mtb8蛋白，包括其单体（8 kDa）和多聚体形式，灵敏度为100 ng/mL，且在慢生长分枝杆菌（SGM）中的反应强度显著高于快生长菌（RGM）。

多克隆抗体对Mtb H37Rv及肺炎常见病原体的反应性

流式细胞术证实三种pAb均可结合完整Mtb菌体，且不与肺炎链球菌等常见呼吸道病原体发生交叉反应，显示出高度特异性。

多克隆抗体对分枝杆菌菌株的反应广度

三种pAb对全部测试的分枝杆菌（包括SGM和RGM）均具反应性，其中LAM pAb和EspB pAb在两组间无显著差异，而Mtb8 pAb在SGM中反应更强，提示其表达与生长特性相关。

LAM pAb作为捕获抗体检测LAM的特性

以LAM pAb为捕获抗体，搭配不同生物素化单克隆抗体（BJRbL01-Bio等）的夹心ELISA检测体系对纯化LAM灵敏度达1 ng/mL，且可特异性检测SGM菌株上清，而不与RGM反应，展现出菌型区分潜力。

该研究成功建立了从同一免疫血清中高效制备三种高特异性pAbs的方法。这些抗体不仅为LAM、EspB和Mtb8的功能研究提供了可靠工具，更在诊断应用上展现出潜力：LAM pAb与特定mAb联用可实现SGM与RGM的区分检测；EspB pAb能识别不同分泌状态的蛋白形态；Mtb8 pAb则揭示了该抗原在致病性分枝杆菌中的表达特性。这些发现对开发新型结核病诊断方法、理解病原体分泌机制及耐药性研究具有重要意义，为后续临床样本验证及治疗应用研究奠定了基础。