TCR模拟抗体MUR35揭示HBV核心肽-MHC识别新机制与靶点生物学突破

本研究发现高选择性TCR模拟抗体MUR35，通过独特轻链互补决定区（CDR）介导的结合模式，精准靶向HBV核心肽（C18）-HLA-A*02:01复合物（pMHC）。研究揭示了保守氨基酸替换对抗原呈效效率的巨大影响，并发现新型9肽靶点（HBcAg19–27），为乙肝（CHB）治疗提供新策略。

　　

引言

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染影响全球2.54亿人，每年导致约110万人死亡。现有核苷（酸）类似物（NUC）和聚乙二醇化干扰素-α（pegIFN-α）疗法难以实现功能性治愈，亟需新策略。HBV特异性CD8⁺ T细胞介导的免疫清除是关键机制，但慢性感染中T细胞功能耗竭。T细胞重定向疗法如T细胞受体工程化T细胞（TCR-T）和双特异性T细胞衔接器（TCE）成为新希望。靶点选择至关重要：病毒肽-MHC复合物（pMHC）因细胞表面丰度低且病毒特异性，优于易受循环抗原干扰的HBsAg靶点。

HBV核心抗原_18–27（C18）是免疫优势10肽表位，主要有C末端缬氨酸（C18-V）和异亮氨酸（C18-I）变体，分别主导基因型B/C和A/D/E感染。两者均在患者中引发CD8⁺ T细胞应答，是理想靶点。

结果

高选择性抗C18-MHC抗体的发现

通过Trianni小鼠免疫和AbCellera单B细胞微流控筛选，从60万个B细胞中获得90个CDR H3家族抗体。25个Fab以0.3–69.0 nM EC₅₀结合C18脉冲T2细胞，且无脱靶结合。丙氨酸扫描显示17个家族具有多残基接触，其中10个可同等结合C18-I和C18-V。

TCE靶点特异性

14个先导抗体转化为T细胞衔接器（TCE）后，11个在无C18肽的U-87 MG细胞中激活T细胞，表明宿主pMHC识别。MUR35、MUR14和HICON06无脱靶活性，且MUR35和MUR14在C18脉冲细胞中具有亚纳摩尔杀伤效力。在10种不同组织来源的HLA-A*02:01⁺细胞系中，三者均未诱导脱靶T细胞激活。

抗体靶点肽特异性的精细表征

X扫描分析显示，MUR35和MUR14对C18第5–9位残基高度敏感，而HICON06选择性集中于第4–6位。基于结合谱的宿主肽预测表明，MUR35仅10个潜在脱靶肽，远低于MUR14（202个）和HICON06（408个）。功能验证证实MUR35 TCE对预测宿主肽无活性。

MUR35 TCE选择性杀伤HBV⁺肝细胞

在HBV感染的原代人肝细胞（PHH）共培养实验中，三者均选择性杀伤感染细胞（基因型D，C18-V），诱导IFN-γ、TNF-α、穿孔素和颗粒酶B释放。MUR35 TCE以0.4 nM EC₅₀清除HBV核心蛋白阳性细胞。意外的是，MUR35 TCE对编码C18-I的基因型C感染肝细胞无杀伤，尽管CTL克隆可介导低水平杀伤。

结构基础与选择性机制

MUR35和MUR14的Fab-pMHC晶体结构揭示独特结合模式：肽接触完全由轻链CDR介导，而MHC接触主要由重链CDR完成。两者均与C18第5–9位残基相互作用，但MUR35对第9位丝氨酸（S9）的约束更强，可能通过诱导S9与V10分子内相互作用及额外HLA（K146）接触实现。尽管第3位脯氨酸（3P）无直接抗体接触，但其与第6位苯丙氨酸（6F）的埋藏式包装对维持结合至关重要，解释了对该位点突变的敏感性。

MUR35与两种C18变体的相似相互作用

患者血清测序（n=1145）证实C18-V和C18-I分别主导基因型A/D和B/C。MUR35 TCE对两者具有相同结合EC₅₀和动力学参数（K_D ~1 nM）。尽管C18-I对HLA亲和力低9倍，但两者pMHC复合物具有相似稳定性（半衰期~100小时）和熔解温度（67°C vs 72°C）。晶体结构显示两者肽构象和轻链CDR相互作用几乎 identical。

MUR35 TCE活性受C18肽变体限制

在感染实验中，MUR35 TCE仅杀伤C18-V编码病毒（基因型D）感染的肝细胞，对C18-I编码病毒（基因型B/C）无效。人源化小鼠肝脏质谱分析揭示机制：基因型D感染肝细胞中C18-V呈递量达315拷贝/细胞，而基因型C中C18-I低于检测限。对照组HBsAg肽（S208和E183）呈递水平相似。非靶向质谱意外发现缺失N端苯丙氨酸的9肽（LPSDFFPSI/V）呈递量高（508和142拷贝/细胞），成为潜在新靶点。

讨论

本研究成功开发了高效特异性靶向HBV pMHC的TCE抗体MUR35，其非典型轻链主导结合模式为TCR模拟抗体设计提供新见解。结构分析揭示通过分子内相互作用间接实现残基选择性的机制。尽管生化结合相似，但C18-I在肝细胞中呈递效率极低，导致基因型特异性杀伤差异，凸显了靶点生物学验证的重要性。意外发现的9肽为泛基因型覆盖提供新方向。这些发现对推进HBV治愈策略具有重要价值。