蛋白质互补法用于细胞中hTERP的定量和定性分析

《Doklady Biochemistry and Biophysics》：Protein Complementation Approach for Quantitative and Qualitative Analysis of hTERP in Cell

hTERP蛋白在HEK293T细胞中的含量分析采用蛋白互补法，通过基因组编辑在C端引入HiBiT标签，利用LgBiT与HiBiT结合激活的荧光素酶活性实现定性与定量检测。

　　

摘要—

如果不分析细胞内蛋白质的含量，就无法研究蛋白质在细胞中的功能。最常用的分析方法——Western blotting（Western印迹）并不总是适用，因为有时无法获得能够特异性识别目标蛋白质的抗体。此外，Western blotting是一种半定量分析方法，无法准确测定细胞内蛋白质的浓度。在这项研究中，我们采用了蛋白质互补法来对细胞中hTERP蛋白的含量进行定性和定量分析。通过基因编辑技术，我们在hTERP蛋白的C端引入了一个HiBiT表位，当该表位与LgBiT结合时，可以恢复活性荧光素酶的活性。最终，我们成功测定了HEK293T细胞系中hTERP蛋白的含量。