单分子追踪揭示FcγRIIB与FcRn在细胞膜动态行为中的关键差异及其对抗体介导内吞的调控意义

本研究通过单分子追踪技术首次揭示FcγRIIB与FcRn在活上皮细胞中的动态分布差异：FcγRIIB具有高膜流动性并介导抗体内吞，而FcRn主要滞留于胞内且表面迁移率极低，为抗体药物递送（如经鼻入脑靶向）提供了关键分子机制依据。

　　

克隆

为构建AP-FcRn-mBFP和AP-FCGR2B-mBFP融合载体，研究者选用pCMV6-ENTRY载体中的序列（FcRn对应NM_001136019，FCGR2B转录变体1对应NM_004001）。在构建AP-FcRn-mBFP质粒时，首先利用定点突变试剂盒（QuikChange Lightning）在信号肽（SP）后方引入NheI与AscI新酶切位点。

FcγRIIB的细胞定位

我们设计了多功能FcγRIIB构建体（AP-FCGR2B-mBFP），其N端携带短生物素受体肽标签（AP），C端连接单体蓝色荧光蛋白（mBFP）。该构建体与内质网靶向BirA质粒共转染T24细胞，后者可特异性生物素化AP标签。为确保AP-FCGR2B-mBFP正确表达且保留功能，我们通过活细胞单分子追踪验证其膜动态行为。

讨论

当前单克隆抗体（mAbs）尤其是免疫球蛋白G（IgG）已成为主流治疗性抗体。经鼻给药作为非侵入性策略，可绕过血脑屏障（BBB）实现脑靶向递送。既往研究证实全长IgG可通过嗅黏膜从鼻腔转运至脑内，其潜在路径包括细胞内转运、细胞旁路途径以及Fc受体（FcRs）介导的胞吞作用。本研究聚焦FcγRIIB与FcRn的动态行为差异，为抗体药物递送机制提供了新见解。

CRediT作者贡献声明

Martino Calamai：综述修订、监督、资源整合、项目管理、方法设计、资金获取、形式分析、数据整理与概念化；Francesco Saverio Pavone：监督与资源支持；Marta Rojas-Rodríguez：初稿撰写、方法实施、研究操作、形式分析与数据整理。

未引用文献

1. 3.

利益冲突声明

作者声明无竞争性利益。

致谢

本项目获欧盟地平线2020研究与创新计划玛丽·居里基金资助（协议编号No 956977）。