CLDN4通过抑制SAA1调控小细胞肺癌细胞增殖的作用机制与治疗意义

本研究揭示紧密连接蛋白CLDN4通过转录调控机制（SP1/DNA甲基化）抑制血清淀粉样蛋白A1（SAA1）表达，进而抑制小细胞肺癌（SCLC）细胞增殖周期。该发现为SCLC这种高侵袭性恶性肿瘤提供了新的治疗靶点和机制见解。

　　

细胞培养

小细胞肺癌（SCLC）细胞系（TKB12、TKB15、TKB16、TKB17、Lu135、Lu139和H1688）和正常人支气管上皮细胞系（NHBE）的获取如先前所述[22]。SCLC细胞系采用RPMI 1640培养基（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation，日本大阪）培养，NHBE细胞采用杜氏改良 Eagle 培养基（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）培养，各添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素。所有细胞均在37°C、5% CO₂的加湿培养箱中培养。

CLDN4在多数SCLC细胞系中表达并定位于细胞边界

通过蛋白质印迹法研究了CLDN4在SCLC细胞系中的表达。结果显示，CLDN4在大多数SCLC细胞系中高表达，而在TKB15和Lu139细胞中检测不到（图1a）。随后通过免疫荧光染色检测了CLDN4在SCLC细胞中的亚细胞定位。在CLDN4阳性的Lu135细胞中，CLDN4沿细胞边界呈线性分布。相反，在CLDN4阴性的TKB15细胞中，仅在细胞质中观察到微弱的CLDN4信号（图1b）。

CLDN4通过细胞周期调控抑制SCLC细胞增殖

CLDN4基因敲除显著促进了H1688细胞的增殖（图2a）。细胞周期分析显示，CLDN4敲除导致处于S期的细胞比例增加（图2b），表明细胞周期进程加速。然而，CLDN4敲除并未影响细胞迁移或侵袭能力（图2c, 2d）。

讨论

本研究表明CLDN4调控SCLC细胞的增殖。从机制上讲，血清淀粉样蛋白A1（SAA1）被确定为一个关键的下游效应因子，其表达在CLDN4敲除后上调，而敲低SAA1则减弱了增殖的增强。CLDN4敲除显著增加了上皮-间质转化（EMT）标志物和MMP14的转录表达。然而，这些变化在蛋白质水平上并未观察到，也未导致SCLC细胞迁移或侵袭的表型改变。

作者贡献声明

Ruri Sugiyama: 调研。Hideki Chiba: 概念化。Takuya Yazawa: 写作-审阅与编辑，验证，监督，项目管理，资金获取。Korehito Kashiwagi: 写作-初稿，可视化，项目管理，调研，资金获取，形式分析，概念化。Hanako Sato-Yazawa: 写作-审阅与编辑，验证，监督，资金获取。Jun Ishii: 写作-审阅与编辑，验证，资金获取。