高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）在阿萨伊果浆及商业产品中人工色素测定的开发与验证研究

本研究开发并验证了一种高效液相色谱-二极管阵列检测（HPLC-DAD）方法，用于同时测定阿萨伊和朱萨拉果浆及冰霜中八种人工合成色素。该方法通过混料设计优化提取流程，结合液液萃取与Carrez试剂去蛋白，在14分钟内实现基线分离，具备高选择性、良好线性（R2>0.98）、低检测限（1.5–6.25?mg·kg?1）及理想回收率（92–105%），为监管食品欺诈和产品真实性评估提供了可靠工具。

　　

Materials, instruments and reagents

所有溶剂均为高效液相色谱（HPLC）级。乙腈（ACN）购自Supelco（美国宾夕法尼亚州），甲醇（MeOH）购自Honeywell（美国北卡罗来纳州）。分析级试剂——乙酸铵（CH₃COONH₄）、氢氧化铵（NH₄OH）、铁氰化钾（K₃[Fe(CN)₆]）和硫酸锌（ZnSO₄）均来自êxodo Científica（巴西圣保罗）。石油醚、正己烷、二氯甲烷（DCM）和乙酸乙酯购自ITW（西班牙巴塞罗那）。

Chromatographic optimization

初始阶段，我们在等度洗脱条件下注入溶剂制备的标准品。随后通过单变量实验调整流动相组成，并评估梯度洗脱程序。在成功实现八种分析物的基线色谱分离后（图1），进一步测试多项参数以确定最优色谱条件。所有试验均在溶剂和空白基质提取液中进行。

检测波长经系统优化，确保各色素在特定吸收波段达到最高灵敏度，为复杂食品基质中的精准定量奠定基础。

Conclusion

我们成功开发并验证了一种简便、选择性高、稳健的HPLC-DAD方法，可用于同步测定阿萨伊果浆、朱萨拉果浆及阿萨伊冰霜中的八种人工合成色素。本方案的主要优势在于其适用于常规监管监测：样品前处理简单（使用DCM进行液液萃取并结合Carrez澄清法），色谱分离快速（<15分钟），且性能可靠，为食品安全与真实性评估提供了强有力的分析工具。

CRediT authorship contribution statement

Carolina Turnes Pasini Deolindo： 撰写初稿，负责方法验证、实验设计、数据分析和概念化。

Rodrigo Barcellos Hoff： 审阅与编辑，参与验证、监督、方法建立与数据分析。

Ana Carolina Oliveira Costa： 审阅与编辑，负责资源协调、项目管理和概念设计。

Declaration of competing interest

作者声明不存在任何已知的竞争性财务利益或个人关系，以避免对本研究产生不当影响。

Acknowledgements

作者感谢Duas Rodas Industrial提供工业染料样品，特别鸣谢LFDA的Fabiano Barreto博士协助获取认证标准品。同时感谢Paulo Gustavo Celso（LFDA）对本项目的支持与概念化建议，并感谢巴西农业与畜牧业部（MAPA）提供本次研究中使用的查封阿萨伊果浆样本。