精子中催产素受体的双重起源（精子发生与附睾成熟）及其在获能调控中的关键作用

本综述深入探讨了催产素受体（OR）在哺乳动物精子中的起源与功能。研究证实，OR不仅来源于精子发生过程，还可能通过附睾顶突分泌的细胞外囊泡（EVs）在附睾成熟阶段整合入精子。功能研究表明，OR通过Gαq/11-PLCβ信号通路调控获能过程，特异性拮抗剂L-371,257与激动剂卡贝催产素（carbetocin）联用可显著增加细胞内钙离子（Ca2+）浓度和膜脂紊乱（M540标记），揭示了OR在雌性生殖道中与配体相互作用调控精子功能的重要机制。

　　

3.1 催产素受体存在于猪精子中

通过免疫印迹和免疫荧光技术，在猪精子中确认了催产素受体（OR）的存在。免疫印迹显示两条特异性条带（41和55 kDa），分别对应OR的非糖基化和糖基化形式。免疫荧光定位显示OR分布于精子 equatorial segment、post-acrosomal region、connecting piece和midpiece。抗体特异性通过肽段阻断实验和阴性对照验证。

3.2 催产素受体存在于睾丸生殖细胞、体细胞及附睾细胞中

免疫组织化学显示，OR在睾丸Leydig细胞、Sertoli细胞及生精细胞（特别是晚期精子细胞和残余体）中表达，但睾丸精子中未检测到。在附睾（caput、corpus、cauda）中，OR表达于principal cells、apical cells以及平滑肌细胞，而narrow cells呈阴性。值得注意的是，附睾principal cells形成的apical blebs及其衍生的囊泡状结构呈现强OR阳性，这些结构可能通过细胞外囊泡（EVs）将OR传递给精子。

3.3 OR存在于附睾顶突提示其在附睾成熟过程中可能被整合入精子

通过CD81、caveolin-1（EVs标志物）和OR的三重免疫荧光染色，发现三者共定位于apical blebs。透射电镜进一步证实apical blebs释放入附睾管腔，并含有异质性内容物，可能经历解离过程形成更小的囊泡结构。这些发现提示，OR可能通过apical blebs/epididymosomes在附睾成熟过程中被整合入精子，这解释了为何附睾精子比睾丸精子具有更广泛的OR分布（如尾部）。

3.4 激活OR不影响精子运动能力

在体外获能条件下，使用OR激动剂（oxytocin, carbetocin）、拮抗剂（L-371,257）及其组合处理精子，并未对精子运动参数（总活力、前进活力、VCL、VSL、VAP、LIN、STR、WOB、ALH、BCF）及基于运动学特征划分的三个精子亚群（SP1: 快速线性；SP2: 慢速中等线性；SP3: 中等速度低线性）分布产生显著影响。

3.5 OR激活在精子获能过程中增加细胞内Ca²⁺水平和膜脂紊乱，但不影响精子活力或顶体完整性

在获能过程中，拮抗剂L-371,257与激动剂carbetocin联合处理（Carb + L-371,257）在120分钟和130分钟（添加孕酮后）显著增加了细胞内钙离子（Fluo4-AM标记）水平，并在60分钟增加了膜脂紊乱（M540标记）程度。单一激动剂或拮抗剂处理均无此效应。所有处理均未影响精子活力（SYBR-14/PI）或顶体完整性（PNA-FITC/[LIVE/DEAD] violet）。

3.6 催产素受体不参与线粒体活性或氧化平衡的调控

所有处理对精子细胞内超氧化物（HE/Yo-Pro-1）、总活性氧（H₂DCFDA/PI）水平以及线粒体膜电位（JC-1）均无显著影响，表明OR不参与调控精子获能过程中的氧化还原状态和线粒体功能。

4 讨论

本研究首次系统阐述了OR在猪精子中的双重起源（精子发生和附睾成熟）及其在获能中的功能。OR在睾丸生精细胞（尤其精子细胞）和附睾上皮细胞（principal cells, apical cells）及其分泌的apical blebs/epididymosomes中表达，提示其可能通过EVs在附睾成熟过程中整合入精子。功能上，OR通过Gα_q/11-PLCβ信号通路参与调控获能早期的膜脂紊乱和钙信号，Carb + L-371,257的效应可能源于L-371,257的药理伴侣（pharmacochaperone）作用稳定了OR，与长效激动剂carbetocin协同激活了该通路。OR对运动参数、顶体反应、氧化平衡和线粒体功能无直接影响，表明其作用具有特定性。

5 结论

哺乳动物精子中的OR可能起源于精子发生和附睾成熟过程。在雄性配子中，OR通过与其在雌性生殖道中的配体相互作用，主要调控精子获能过程，具体表现为增加细胞内Ca²⁺水平和膜脂紊乱。OR的激活对精子活力、顶体完整性、运动能力、氧化平衡和线粒体功能无显著影响。其作用机制可能涉及Gα_q/11-PLCβ信号通路。后续研究应深入探讨调控OR是否影响精子的受精能力。