基于二代测序技术揭示创伤性与龋源性根尖周病变微生物组差异及弯曲菌属(Campylobacter)的标志性作用

本研究采用16S rRNA测序技术，首次系统比较创伤性与龋源性根尖周病变的微生物组差异。研究发现创伤组微生物多样性显著降低（P<0.01），并鉴定出弯曲菌属（Campylobacter）作为创伤性病变的特征性生物标志物（LDA≥2），为精准牙髓治疗提供新靶点。

　　

ABSTRACT

背景

虽然龋源性根尖周病变的微生物组已被广泛表征，但创伤性根尖周病变的微生物特征仍知之甚少。本研究旨在表征创伤性根尖周病变的根尖微生物组，并鉴定创伤性与龋源性根尖周病变之间的分类学差异。

方法

研究纳入20例根尖周病变患者，包括10例创伤性病例（创伤组）和10例龋源性病例（龋坏组）。使用无菌纸尖采集根管渗出物样本，提取DNA后对16S rRNA基因高变V3-V4区进行Illumina测序。生物信息分析包括α多样性、基于Bray-Curtis距离的β差异分析和差异丰度测试（LEfSe方法，LDA评分≥2.0）。

结果

测序共揭示36个细菌门和587个属。创伤组弯曲菌属（Campylobacter）相对丰度显著高于龋坏组（P=0.002），而普雷沃菌属（Prevotella）（P=0.008）、弧菌属（Vibrio）（P=0.041）和线形杆菌属（Filifactor）（P=0.006）丰度降低。基于相对丰度，创伤组的核心微生物群包括福赛斯菌属（Phocaeicola）、卟啉单胞菌属（Porphyromonas）和金字塔杆菌属（Pyramidobacter）。LEfSe分析确定弯曲菌属为创伤组的生物标志物。

结论

与龋源性根尖周病变相比，创伤性根尖周病变表现出更低的微生物多样性，弯曲菌属被确定为创伤性根尖周病变的潜在特征性分类单元。

引言

细菌感染是根尖周炎发展的基本病因驱动因素。牙科创伤导致血管受损，引起牙髓坏死，从而破坏牙髓对微生物入侵的先天免疫反应，包括成牙本质细胞屏障功能和吞噬活性。值得注意的是，创伤后2-3周内可通过开放的牙本质小管或牙釉质裂纹发生细菌浸润。上颌前牙表现出最高的创伤易感性，占流行病学研究中报告的牙损伤的78-96%。与此模式一致，根尖显微手术病例的回顾性分析发现，需要牙髓治疗的前牙中58.4%存在创伤病因。这提出了一个关键的临床问题：创伤性根尖周病变是否表现出与慢性龋坏暴露引起的病变相同的微生物学特征和致病机制？

当代宏基因组研究已确定牙髓感染构成具有显著个体间异质性的多微生物群落。新证据表明不同微生物群落之间存在功能冗余，其中系统发育多样化的群落可能通过保守的代谢途径获得相当的毒力潜力。然而，不同微生物群落的基础致病机制可能存在显著差异。微生物群落通过群体感应系统、代谢物交换网络和抗菌代谢物生产进行复杂的生态相互作用。这些种间通讯最终驱动群落功能结构的适应性重组。

龋源性根尖周病变显示厌氧菌占主导地位，核心微生物群包括卟啉单胞菌属（Porphyromonas）、普雷沃菌属（Prevotella）、梭菌属（Clostridium）和链球菌属（Streptococcus）物种。虽然创伤性根尖周病变的微生物组仍未充分探索，但一项基于培养的创伤后牙髓坏死开创性研究显示，专性厌氧菌占主导地位，其中细小微球菌（Micrococcus fine）（50%）、痤疮丙酸杆菌（Propionibacterium acnes）（45%）、核梭杆菌（Clostridium nucleatum）（30%）、颊普雷沃菌（Prevotella buccalis）（30%）和长梭杆菌（Fusobacterium longum）（25%）构成核心病原体。类似研究从冠部完整的创伤牙中分离培养微生物，包括口腔链球菌（31%）、α-溶血革兰阳性球菌和α-溶血革兰阳性杆菌（52%）、葡萄球菌属（6.7%）和芽孢革兰阳性杆菌（10.3%）。

值得注意的是，积累的证据证实细菌不仅限于根管内空间，而且可以通过根尖孔迁移到根尖周组织定植，形成根外微生物群落。一项关注持续性根尖周炎的研究系统表征了根内和根外感染的微生物群落，在根尖周组织中鉴定出多种细菌物种，包括卟啉单胞菌属、普雷沃菌属和梭杆菌属。类似地，配对根尖和根尖周病变的二代测序分析揭示了根尖周病变中独特的细菌群落，其中如不可见戴阿利斯特菌（Dialister invisus）和陋居线形杆菌（Filifactor alocis）等物种与持续性炎症的临床体征显著相关。虽然大多数根尖周感染源于根内生物膜，但根尖微环境变化，包括缺氧梯度形成、营养富集和免疫活性细胞浸润，作为根内和根外感染之间不同微生物群落结构的生态驱动因素。

传统培养方法由于苛求生长要求和可存活但不可培养（VBNC）状态，在培养>50%口腔微生物群方面存在固有局限性。应对这些限制，二代测序（NGS）平台已成为全面微生物分析的黄金标准。与传统培养相比，NGS达到97.3%的分类分辨率，能够全面检测低丰度分类单元（<0.01%相对丰度），识别不可培养病原体，表征新的潜在致病物种，同时保持对非存活细菌基因组残留的敏感性。16S rRNA基因测序利用其跨物种序列的保守性和变异性，能够有效识别样本中的微生物分类单元并全面分析群落组成。在其高变区中，V3-V4区域具有中等长度（约460 bp）、高覆盖度和与Illumina短读长平台的兼容性，已成为微生物群落多样性分析中广泛使用的扩增靶标。

虽然龋源性根尖周病变的微生物群特征已被很好表征，但创伤性根尖周病变的分类特征和毒力决定因素仍不清楚。这两种病因类型之间微生物群落的比较分析可能揭示不同的环境驱动致病机制，并确定针对创伤性根尖周病变的潜在治疗靶点。因此，本研究旨在使用16S rRNA基因测序系统比较创伤性和龋源性根尖周病变的微生物组组成，量化分类差异，并确定创伤性根尖周病变中的关键分类单元，为开发针对病变特异性关键病原体的精准牙髓治疗奠定基础。

材料与方法

受试者招募

研究经昆明医科大学口腔医院医学伦理委员会批准（KYKQ2022MEC002），并获得患者知情同意。选择20例诊断为慢性根尖周炎的患者。这些患者于2023年9月至12月期间就诊于昆明医科大学口腔医院牙体牙髓科。然而，排除有系统性疾病、过去三个月内服用抗生素或激素药物或怀孕的患者。所有纳入牙齿在影像检查中显示根尖低密度阴影，牙髓温度测试无反应，牙髓电活力测试无反应——具体而言，患者对热或电刺激无感知或疼痛。无牙髓治疗史、窦道或附着丧失。X线片也显示无显著牙槽骨吸收。筛选的患牙分为两组。第一组称为创伤组（n=10），包括因创伤导致慢性根尖周炎的牙齿。具体而言，该组包括有咬合创伤、创伤史或正畸治疗史且冠部完整无牙髓连通缺陷或龋坏的牙齿。第二组龋坏组（n=10），由龋坏引起的慢性根尖周炎牙齿组成。具体而言，该组包括有显著牙髓连通缺陷的牙齿，如深龋或继发龋。此外，这些牙齿无咬合创伤、外伤史或正畸治疗史。

样本采集

选择符合标准的牙齿后，牙髓医生遵循严格无菌程序从根管获取细菌样本。具体操作如下：

使用橡皮障套件和牙线紧密隔离牙齿，确保手术区域与口腔环境无沟通。橡皮障、障夹和牙面用碘伏消毒。所有器械，包括高速手机、车针、锉、根测尺、纸尖、镊子和冲洗针头，均经过高压灭菌。

对于创伤组牙齿，消毒后直接使用高速手机和车针制备开髓洞形。对于龋坏组牙齿，去除龋坏组织或旧充填体后，用碘伏再次消毒牙齿和橡皮障表面，然后制备开髓洞形。

借助根尖定位仪准确测量工作长度（WL）。使用手用锉严格按照WL疏通和成形根管直至25号，防止器械超出根尖孔。使用无菌生理盐水用无菌针头冲洗根管口，并用常规无菌纸尖干燥根管中上段。

使用镊子和根测尺，在无菌吸收纸尖（20号，02锥度）上标记（WL+3mm）的采样长度。依次使用五根这样标记的超细纸尖吸收根尖区域和超出根尖孔3mm的渗出物。确保纸尖从取出到插入根管期间不接触除镊子和测量尺以外的任何物体。操作过程中，纸尖缓慢推进；如果遇到显著阻力，立即停止操作以防止用力损伤根尖周组织。取出后检查纸尖确保无弯曲、折皱或变形，然后立即放入2ml冻存管并储存于液氮中。此外，如果观察到纸尖被血液污染，则丢弃样本。

基因组DNA提取和16S rRNA基因测序

使用CTAB法从样本中提取基因组DNA。用NanoDrop 2000分光光度计测定DNA纯度和浓度，并通过1%琼脂糖凝胶电泳评估DNA完整性。随后，使用Phusion? High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer（New England Biolabs）通过聚合酶链反应（PCR）扩增V3和V4可变区。上游引物为341F（5′-CCTAYGGGRBGCASCAG-3′），下游引物为806R（5′-GGACTACNNGGGGTATCTAAT-3′）。

根据各自浓度将PCR产物分成单独等份。然后使用2%琼脂糖在1×TAE缓冲液中进行琼脂糖凝胶电泳纯化。随后使用Universal DNA Purification and Recovery Kit提取目标条带。

使用NEB Next? Ultra DNA Library Prep Kit构建文库，并通过qPCR用Agilent 5400对所得文库进行测试和定量。

序列分析

使用QIIME2中的DADA2插件（版本1.22.0）处理所有样本的所有原始输入序列，包括质量控制、去噪（纠正测序错误）、合并和嵌合体去除，以生成扩增子序列变异（ASVs）。

对于质量控制，从正向和反向序列的5'端分别截断23和26个碱基。从5'到3'端检查读长：第一个质量得分≤2的碱基及所有后续碱基被截断；如果剩余长度短于指定保留长度（正向和反向序列均为249 bp），则丢弃序列。

对每个样本独立进行去噪，使用1,000,000条读长训练错误模型。

对于序列合并，使用正向引物（CCTAYGGGRBGCASCAG）和反向引物（GGACTACHVGGGTWTCTAAT），成功合并要求正向和反向序列之间的重叠区域大于12 bp阈值。

对于嵌合体去除——在去噪后对每个样本进行独立检测——DADA2使用默认的“共识”方法：仅当在两个或更多样本中检测到嵌合体时才被标记并去除。

使用QIIME2的feature-classifier以99%相似性阈值将ASVs的代表性序列查询预训练的Greengenes2数据库（修剪至由338F/806R引物对侧翼的V3V4区域）以获得物种注释。基于这些注释，排除注释为叶绿体、线粒体或在界水平未注释的ASVs及其组成序列。随后，计算每个样本在界、门、纲、目、科、属和种水平上的序列计数相对于总数的比例，以评估跨样本的物种注释分辨率。

统计分析

对于α多样性分析，进行组间物种差异测试以评估数据的正态性和方差齐性，使用IBM SPSS V25.0。结果表明数据不服从正态分布且方差不齐。随后，应用Mann-Whitney U检验确定观察到的差异的显著性。获得的P值小于0.05，表明差异具有统计学意义。基于Bray-Curtis距离、加权UniFrac距离和非加权UniFrac距离通过主坐标分析（PCoA）评估样本间微生物群落的相似性，同时使用PERMANOVA检验评估两组间微生物群落的相似性。

结果

研究人群

表1描述了参与者的人口学和临床特征，包括年龄、性别、牙位和疼痛症状。在这些变量中，创伤组平均年龄为27.4岁，龋坏组为37.9岁。两组间年龄观察到统计学显著差异（P=0.032，P<0.05）。组间在性别、牙位或疼痛症状方面未观察到统计学显著差异。

微生物群落的ASV分析

本研究从龋源性和创伤性根尖周病变的根尖内外区域采集了10个细菌样本进行16s rRNA测序分析，共获得3,427,817条原始序列。经过原始序列的质量控制、去噪、拼接和去嵌合体后，获得了3,014,582条高质量序列。具体而言，1,549,458条序列来自龋坏组，而创伤组产生了1,465,124条序列。平均每个样本包含150,729.1条序列，平均序列长度为423.16个碱基对。图1说明龋坏组共鉴定出2069个ASVs，其中1676个ASVs为该组独有。相比之下，创伤组有1221个ASVs，其中828个是独特的。总体而言，两组表现出总共393个共享ASVs。

微生物群落组成

在门水平共鉴定出36个门。其中，五个最丰富的门和属被视为优势门。龋坏组的优势门是拟杆菌门（Bacteroidota）（31.45%）、变形菌门（Proteobacteria）（17.04%）、厚壁菌门A（Firmicutes_A）（14.40%）、放线菌门（Actinobacteriota）（9.58%）和梭杆菌门（Fusobacteriota）（6.46%）。创伤组的优势门是拟杆菌门（Bacteroidota）（36.60%）、变形菌门（Proteobacteria）（16.80%）、互养菌门（Synergistota）（9.39%）、放线菌门（Actinobacteriota）（8.55%）和厚壁菌门A（Firmicutes_A）（8.20%）。图2a说明了创伤组和龋坏组中15个最丰富的门。在属水平共鉴定出587个细菌属。龋坏组最普遍的属是普雷沃菌属（Prevotella）（13.92%）、福赛斯菌属（Phocaeicola）（6.99%）、梭杆菌属C（Fusobacterium_C）（6.41%）、金字塔杆菌属（Pyramidobacter）（3.87%）和弧菌属（Vibrio）（3.36%）。创伤组的优势属是福赛斯菌属（Phocaeicola）（15.46%）、卟啉单胞菌属（Porphyromonas）（9.55%）、金字塔杆菌属（Pyramidobacter）（8.31%）、假单胞菌属（Pseudomonas）（8.26%）和放线菌属（Actinomyces）（3.86%）。图2b说明了创伤组和龋坏组中15个最普遍的属。

微生物多样性

在α多样性分析之前，对所有样本进行稀释曲线分析，其中随机采样具有统一测序深度的数据以标准化测序深度，确保后续多样性指数计算的可靠性。图3说明了创伤组和龋坏组的α多样性。创伤组的Shannon、Chao1和Simpson指数均低于龋坏组，表明创伤组的α多样性确实较低（P=0.001）。相比之下，两组间的Faith's PD指数差异无统计学意义（P=0.248），这意味着两组的微生物系统发育多样性在可比水平上进化。

进行主坐标分析（PCoA）以评估创伤组和龋坏组间微生物群落结构差异，使用三种不同的距离度量：Bray-Curtis、加权UniFrac和非加权UniFrac（图4）。Bray-Curtis距离关注物种丰度相似性而不考虑进化关系，显示两组间存在重叠聚类区域。然而，具有999次置换的置换多元方差分析（PERMANOVA）表明整体微生物群落结构存在统计学显著差异（P=0.042）。加权UniFrac距离——一个整合物种进化关系和相对丰度的指数，其中优势物种贡献更大——显示两组间无统计学显著差异（P=0.246）。非加权UniFrac距离基于物种存在/缺失和进化关系，优先考虑稀有或地方性物种，检测到创伤组和龋坏组间低丰度物种组成存在显著统计学差异（P=0.016）。

创伤组与龋坏组间的物种差异

分别在门、属和种水平选择相对丰度最高的前15个物种。随后对龋坏组和创伤组进行物种差异分析，如图5a-c所示。结果表明，在门水平，创伤组弯曲菌门（Campylobacterota）的相对丰度大于龋坏组，且该差异具有统计学意义（P=0.002）。此外，在属水平，龋坏组普雷沃菌属（Prevotella）、弧菌属（Vibrio）和线形杆菌属（Filifactor）的相对丰度大于创伤组，且差异具有统计学意义（分别为P=0.008、0.041和0.006）。在种水平，龋坏组口腔普雷沃菌（Prevotella oris）、绒毛线形杆菌（Filifactor villosus）和口腔杆菌属（Oribacterium）的相对丰度大于创伤组，且差异具有统计学意义（分别为P=0.018、0.007和0.004）。

如图6a和6b所示，线性判别分析效应大小（LEfSe）差异分析结果（LDA≥2）如下。在门水平，创伤组弯曲菌门（Campylobacterota）的丰度大于龋坏组（P<0.05）。相反，观察到龋坏组厚壁菌门A（Firmicutes_A）的丰度大于创伤组（P<0.05）。在属水平，七个属的相对丰度在龋坏组中大于创伤组， namely, 普雷沃菌属（Prevotella）、弧菌属（Vibrio）、线形杆菌属（Filifactor）、梭杆菌属C（Fusobacterium_C）、厌氧球菌属（Anaeroglobus）、口腔杆菌属（Oribacterium）和月形单胞菌属（Selenomonas）。此外，弯曲菌属A（Campylobacter_A）的相对丰度在创伤组中大于龋坏组。

讨论

本研究采用16S rRNA测序比较表征了创伤性和龋源性根尖周病变的根尖微生物组。该研究追求两个目标：（1）分析这两种致病微生物群落之间的结构相似性和生态差异；（2）识别与创伤性根尖周病变特异性相关的特征性微生物组成和关键物种。值得注意的是，这是对创伤性根尖周病变微生物组的首次系统研究，是口腔微生物生态学中一个先前未探索的研究领域。

为了客观表征初始致病进展过程中的微生物组成，同时最小化后续临床干预对先驱定植的混杂影响，专门选择原发性根尖周感染进行采样。鉴于非手术方法在同时获取根尖内外感染组织方面的技术限制，获得的微生物特征 specifically represent 根尖范围内的悬浮微生物。为了克服非手术采样方法固有的技术限制，战略性地部署了超出WL的无菌纸尖以捕获潜在的孔外微生物群，从而减少标本采集过程中对根尖周结构的机械干扰。

在本研究中，创伤性根尖周病变的根尖微生物群落是多微生物组成。创伤性根尖周病变中鉴定的主要细菌物种是福赛斯菌属（Phocaeicola）、卟啉单胞菌属（Porphyromonas）、金字塔杆菌属（Pyramidobacter）、假单胞菌属（Pseudomonas）和放线菌属（Actinomyces）。回顾早期研究，我们观察到各种关于创伤牙微生物组成的研究结果不一致。一项关于未成熟恒牙创伤性牙髓坏死伴或不伴根尖周炎的研究，分析了根管预备前的根管内微生物样本，确定最普遍的分离株为Peptostreptococcaceae[Eubacterium]yurii（8.9%）、具核梭杆菌/梭形梭杆菌（Fusobacterium naviforme/nucleatum）（6.4%）、二氧化碳噬纤维菌属（Capnocytophata sp.）（5.8%）、毗邻颗粒链菌（Granulicatella adiacens）（5.1%）、啮蚀艾肯菌/金氏金菌（Eikenella corrodens/Kingella denitrificans）（4.5%）、血链球菌（Streptococcus sanguinis）（3.8%）、苛求斯莱克菌（Slackia exigua）（3.2%）和放线菌属（Actinomyces sp.）（2.6%）。另一项比较创伤性牙髓坏死与其他感染原因引起的非创伤性牙髓坏死根管内微生物组成的研究表明，创伤性牙髓坏死的根管也表现出高度的微生物多样性，创伤牙与非创伤牙其他感染起源之间存在显著的组成差异。这些差异可能与样本纳入标准、微生物检测方法、牙齿类型和其他因素有关。此外，创伤牙个体病例的微生物组成存在相当大的变异性，正如我们PCoA分析中创伤组样本相对分散的分布所证明的那样。

创伤性根尖周病变中检测到的主要细菌物种在其龋源性对应物中保持高定植水平，仅在相对丰度上有所不同。此外，PCoA排序模式中存在 substantial spatial overlap——基于Bray-Curtis距离仅有边际统计差异，基于加权UniFrac距离无统计差异——加上有限样本量（n=10/组）限制了统计效力，支持创伤性和龋源性根尖周病变之间微生物群落的收敛性。这表明创伤性根尖周病变的细菌感染可能更多来源于口腔环境，而非 solely through anachoresis——细菌被“吸引”并迁移到身体受损或坏死组织部位，在那里定植和增殖，例如在创伤或缺血的牙髓组织中。趋化假说在1940年代牙髓学理论中占主导地位，假定通过循环传播血源性微生物定植退化牙髓组织。随后，有说服力的微生物学数据系统取代了这一范式，证明创伤后微生物感染主要来源于龈沟/口腔生物膜，血源性传播在创伤后微生物发病机制中作用可忽略。

此外，创伤性根尖周病变中检测到的总微生物负荷显著低于龋源性对应物。α多样性分析揭示了创伤性根尖周病变中微生物丰富度减少和均匀度降低，物种组成不如龋源性根尖周病变复杂。这种生态差异可能与两组间不同的微生物浸润途径有关。龋源性根尖周病变的根管系统与口腔环境直接相连，而创伤性根尖周病变的牙冠完整，阻断了口腔微生物直接进入根管。创伤后，牙冠表面产生严重程度不一的微裂纹，龈沟和牙周韧带等牙周组织也受损，这为口腔微生物进入牙髓复合体建立了潜在的浸润途径。

病理表现源于微生物群落内的多微生物协同作用。种间动态决定群落的整体生态行为，并且由于不同的物种组成和丰度，群落的致病能力也各不相同。根据我们的实验结果，虽然创伤性和龋源性根尖周病变之间存在各种共享微生物，但物种组成的组间差异分析和LEfSe分析结果显示两组间某些微生物组成存在显著差异。即使对于共享物种，它们的相对丰度在两组间也表现出明显区别。因此，有必要区分创伤性根尖周病变和龋源性根尖周病变。厚壁菌门与拟杆菌门的比率被认为与生态失调有关，例如厚壁菌门物种丰度增加与肥胖相关，而拟杆菌门物种与肠道炎症相关。厚壁菌门与拟杆菌门的比率升高可能促进口腔生态失调。持续性感染根管中厚壁菌门与拟杆菌门的比率低于原发性感染根管。在本研究中，创伤性根尖周病变中厚壁菌门与拟杆菌门的比率（0.22）低于龋源性根尖周病变（0.46），这可能表明创伤性根尖周病变的微生物生态比龋源性根尖周病变更稳定。

在本研究中，观察到创伤性根尖周病变中普雷沃菌属（Prevotella）、弧菌属（Vibrio）和线形杆菌属（Filifactor）显著低于龋源性根尖周病变。专性厌氧分类单元，特别是普雷沃菌属（Prevotella spp.）在慢性呼吸病理中的减少表明，气道微生物组内的微生物生态失调可能通过损害定植抗性和改变代谢交叉喂养网络来促进肺部疾病进展。创伤性根尖周病变相对隔离的微生物群落可能创造与龋源性根尖周病变不同的微环境条件（例如pH和氧水平）， potentially driving 专性厌氧分类单元如普雷沃菌属的减少。然而，这些厌氧菌丰度变化是否在肺部疾病进展背景下创伤性根尖周病变的发病机制中起作用仍有待验证。

值得注意的是，脓肿福赛斯菌（Phocaeicola abscessus），一种革兰阴性严格厌氧菌，是两种类型根尖周病变中高度丰富的物种。先前研究显示在有症状的持续性感染根管中检出率高。脓肿福赛斯菌在经牙髓治疗但有持续症状的根管中的存在可能归因于其对常规牙髓治疗的抵抗力以及从原发性感染根管迁移的能力。

通过组间差异分析和LEfSe差异分析，弯曲菌属（Campylobacter）成为创伤性根尖周病变的判别性物种。这一发现与先前研究一致，该研究也观察到该属在创伤性牙髓坏死根管中的高检出率，表明弯曲菌属在创伤相关牙髓和根尖周感染中 potential specific colonization tendency。弯曲菌属在持续性感染根管中比在原发性感染根管中更丰富，检出率高达90%。弯曲菌属表现出多功能毒力机制，包括内在抗菌耐药性、生物膜粘附/形成、细胞毒素分泌和宿主免疫逃避能力，与侵袭性牙周炎进展有临床关联。体外研究显示，口腔弯曲菌与肠道对应物相比表现出显著更强的生物膜形成能力。一项比较氢氧化钙和氯己定凝胶在未成熟恒牙创伤性牙髓坏死再生牙髓治疗中疗效的研究表明，弯曲菌仅在氢氧化钙封药后的根管中检测到。这可能表明氢氧化钙在消除根管弯曲菌方面效果差，尽管这一发现对该研究中再生牙髓治疗的成功或失败没有影响。尽管本研究中检测到的弯曲菌属显示亚优势定植状态，但某些低丰度操作分类单元（ASVs）表现出能够诱导生态失调的关键病原体特征。这些关键分类单元通过非冗余生态相互作用不成比例地影响群落结构和功能动态，独立于其时空丰度分布。