基于替代基质策略的大鼠血浆中原卟啉IX（PPIX）生物分析方法开发与验证及其在光动力诊疗中的应用研究

本文开发并验证了一种基于高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FLD）的大鼠血浆中原卟啉IX（PPIX）定量分析方法，采用可见光剥离内源性PPIX的替代基质策略，完全遵循ICH M10指南要求。该方法线性范围10–700 ng/mL（r ≥ 0.995），定量下限10 ng/mL，精密度与准确度良好，稳定性验证充分，成功应用于氨基乙酰丙酸诱导的体内研究，为内源性化合物分析提供了符合国际标准的范例。

　　

Highlight

Standards and reagents

原卟啉IX（≥95.0%）、中卟啉IX二盐酸盐（≥94.0%）、三氟乙酸（≥99.0%）、氨基乙酰丙酸（≥97.0%）购自Sigma-Aldrich（美国密苏里州）。乙腈、异丙醇、二甲基甲酰胺、乙酸和甲酸（LC-MS级）购自VWR International（比利时鲁汶）。HPLC级甲醇购自Carlo Erba Reagents S.A.S.（法国）。超纯水通过ELGA Veolia PURELAB系统自制。

Optimization of HPLC-FLD conditions

色谱柱参数优化特别关注了粒径选择。根据Benton等对卟啉类化合物（虽非特异性针对PPIX）的研究，采用2.4 μm颗粒的色谱柱在分辨率、分离速度和灵敏度方面均表现优异。

Discussion

方法开发旨在建立可精准定量内源性PPIX水平的可靠方案。据我们所知，自ICH M10指南发布以来，尚未有符合该标准的原卟啉类化合物定量方法报道。本研究采用替代基质策略，通过光漂白技术自制大鼠血浆替代基质，成功实现了校准样本的精准制备。

CRediT authorship contribution statement

Aliz Széles: 原始文稿撰写，实验操作，形式化分析。Károly Sch?ll: 文稿审阅与编辑。Gábor Hirka: 资源提供，资金支持。Katalin Monostory: 文稿审阅与编辑，研究监督，方法设计，资金获取，概念形成。Tibor Renkecz: 文稿审阅与编辑，研究监督，资源提供，方法设计，概念形成。

Funding

本研究获2018-1.2.1-NKP-2018-00005和TKP2021-EGA-31（匈牙利国家研发创新基金）资助。2020–1.1.2-PIACI-KFI-2020-00021项目由匈牙利创新与技术部通过国家研发创新基金提供支持。2024–2.1.2-EK?P-KDP-2024-00002大学研究奖学金亦参与资助。

Declaration of competing interest

作者声明以下可能构成竞争利益的财务/个人关系：Tibor Renkecz、Katalin Monostory和Aliz Széles均报告获得匈牙利国家研发创新基金资助。其余作者声明无竞争利益。

Acknowledgements

作者衷心感谢ágnes Szeker、Mária Németh、Angelika Turi（生物分析方向）以及Marcell Madár、Katalin Csendes、ágota Jó（样本采集与动物实验）提供的卓越技术支持。