疏水性低共熔溶剂原位萃取-衍生化技术在食品生物胺分析中的应用研究

本研究创新性地开发了基于百里酚-癸酸疏水性低共熔溶剂（HDES）的超声辅助分散液液微萃取（UA-DLLME）技术，实现了食品中6种生物胺（BAs）的高效原位萃取与HPLC-UV分析。该方法通过优化萃取条件（10 mg DnCl，100 μL THY-DA，50℃超声5 min），展现出优异线性（10–250 mg·L?1，R2>0.98）、高灵敏度（LOD 0.21–0.67 mg·L?1）和良好回收率（88.5–99.4%），并通过AGREE（0.53）与BAGI（70.0）评估证实其绿色分析特性。

　　

Chemicals and reagents

本研究使用的所有化学品与溶剂分别达到分析级和色谱级标准。尸胺二盐酸盐（CAD）、腐胺二盐酸盐（PUT）、色胺盐酸盐（TRP）、酪胺盐酸盐（TYR）、精胺三盐酸盐（SPM）、辛酸（OA）、癸酸（DA）和十二酸（LA）购自Sigma-Aldrich（美国密苏里州）。组胺二盐酸盐（HIS）与百里酚（THY）采购自麦克林（中国上海）。丹磺酰氯（DnCl）和乙腈（ACN）来自默克（德国达姆施塔特）。实验用水为超纯水（18.2 MΩ·cm）。

Results and discussion

根据Tomé等人的研究，低共熔溶剂（DES）可通过氢键受体（HBA）与氢键供体（HBD）按特定摩尔比混合形成。本研究中，百里酚（THY）与癸酸（DA）以1:1摩尔比通过氢键自组装形成新的共晶相，其熔点低于单一组分，实现了室温下稳定存在的液态疏水性DES（HDES）。通过傅里叶变换红外光谱（FTIR）验证了羟基伸缩振动峰从3440 cm^?1（THY）和3300–2500 cm^?1（DA）移至3360 cm^?1（THY-DA），证实氢键形成。核磁共振氢谱（¹H NMR）显示DA的羧酸质子信号消失，进一步支持氢键网络构建。差示扫描量热法（DSC）分析表明THY-DA的熔点为13.7℃，显著低于THY（49.5℃）和DA（31.2℃）。

超声辅助分散液液微萃取（UA-DLLME）条件经系统优化后确定为：10 mg丹磺酰氯（DnCl）、100 μL THY-DA萃取剂、50℃超声5分钟。该条件成功实现6种生物胺（色胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺和精胺）的同步萃取与衍生化。HPLC-UV采用C18整体柱进行分离，线性范围10–250 mg·L^?1（R²=0.9816–0.9979），检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为0.21–0.67 mg·L^?1和0.62–2.02 mg·L^?1。日内与日间精密度RSD均低于2.84%。在发酵食品（达拜糕）和棕榈汁样品中，相对回收率达88.5–99.4%（RSD<4.3%），证实方法在实际基质中的可靠性。

Conclusion

本研究建立了一种基于疏水性低共熔溶剂（HDES）的快速绿色UA-DLLME方法，用于食品中生物胺的高效萃取与测定。该方法以低溶剂消耗、短分析时间和优良分析性能为特点，为传统检测技术提供了创新性替代方案。