基于实时荧光PCR同步检测幽门螺杆菌感染及克拉霉素耐药基因突变的新方法：新加坡单中心横断面研究

本研究开发了一种基于荧光熔解曲线分析（FMCA）的实时PCR（RT-PCR）技术，可同步检测胃组织活检样本中的幽门螺杆菌（H. pylori）感染及其23S rRNA基因A2142G/A2143G点突变（与克拉霉素（CAM）耐药相关）。该检测在407例临床样本中显示出与培养法高度一致性（94.1%），对CAM耐药基因型检测的敏感性与特异性分别达87.5%与95.4%，为临床提供快速精准的病原诊断与耐药性筛查方案。

^Highlight

^INTRODUCTION

幽门螺杆菌（H. pylori）是一种革兰阴性微需氧微生物，全球感染人数约44亿[1]。新加坡总体感染率估计为31%，65岁以上人群感染率超过70%[2]。H. pylori感染可引起慢性进展性胃炎症，并导致多种疾病，包括消化性溃疡和胃癌[3]。胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤和第三大癌症死亡原因...

^{Study population}

本研究纳入的患者均呈现疑似H. pylori感染症状——上腹痛、消化不良、恶心、腹胀、嗳气、早饱、胃肠道出血和/或消化性溃疡。

^{Gastric sample biopsy}

患者在2018至2020年间接受胃镜检查。所有进行胃活检的样本均同步采用H. pylori培养法和PCR法进行检测。符合条件的患者年龄≥21岁且未接受过H. pylori根除治疗。

^{Precision analysis}

精密度分析显示：在运行间分析中，野生型、A2143G和A2142G菌株的熔解温度（Tm）范围分别为76.3-76.8°C（76.4 ± 0.60°C）、72.0-72.8°C（72.4 ± 1.11°C）和73.5-74.0°C（73.6 ± 0.75°C）；在运行内分析中，则分别为76.2-76.3°C（76.3 ± 0.15°C）、72.7-72.8°C（72.7 ± 0.15°C）和73.8-73.8°C（73.8 ± 0.00°C）。表2展示了菌落PCR的运行间与运行内变异系数...

^DISCUSSION

传统H. pylori微生物学诊断依赖培养法和表型鉴定方法，这些方法存在报告延迟和菌株存活率问题。分子技术为病原体检测提供了更快速、信息更丰富的解决方案。本研究系统比较了实验室自主研发的PCR检测与细菌培养法在H. pylori检测和克拉霉素（CAM）药敏测试中的性能...

^CONCLUSIONS

我们成功开发了一种经济高效的实时PCR检测方法，可同步准确检测H. pylori感染和23S rRNA基因中导致克拉霉素（CAM）耐药的点突变。此外，我们还首次描绘了新加坡人群H. pylori感染的基因型CAM耐药谱系。