基于UHPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技术的对香豆酸与DPPH自由基反应机制解析及其抗氧化途径研究

本综述系统阐述了对香豆酸（p-CA）与DPPH自由基反应的详细机制，通过超高效液相色谱-电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱（UHPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS）技术首次鉴定出三种关键反应产物：p-CA二聚体（m/z 325.0709）、p-CA-DPPH加合物（m/z 556.1093）和新型radimerSB结构（m/z 718.1403）。研究证实自由基加合物形成（RAF）是主要抗氧化途径，为酚酸类化合物的抗氧化机制研究提供了重要理论依据。

　　

Highlight亮点聚焦

Materials实验材料

2,2-二苯基-1-苦基肼自由基（DPPH^• – C₁₈H₁₂N₅O₆^•，分子量394.32 g/mol）和反式-4-羟基肉桂酸（p-CA – C₉H₈O₃，分子量164.16 g/mol）等高纯度HPLC级试剂为本研究提供了坚实的物质基础。这些核心化合物及其详细参数见补充材料图S1A。

DPPH^• analysis自由基清除分析

通过半数抑制浓度（IC₅₀）测定显示，p-CA的DPPH自由基清除能力与标准抗氧化剂没食子酸和芥子酸相当（详见表1）。虽然DPPH法通常采用Trolox作为标准品，但总酚测定等方法的标淮物为没食子酸——该化合物因卓越的氢原子供给能力而被选为本研究的参照基准。

Conclusion研究结论

本研究成功解析了三个关键反应产物的结构特征：p-CA二聚体（m/z 325.0709）、p-CA-DPPH^•加合物（m/z 556.1093）以及被命名为radimerSB的新型结构（m/z 718.1403）。特别值得关注的是，通过质谱碎片分析揭示了m/z 363.0765特征碎片的形成机制，该碎片来源于DPPH自由基中约99 Da片段的特异性保留。这些发现不仅证实了自由基加合物形成（RAF）是p-CA的主要抗氧化途径，更首次通过实验验证了其碎片化路径，为理解酚类化合物的抗氧化机制提供了突破性见解。