拟南芥过氧化物酶AtPrx71通过调控生长素代谢抑制茎伸长与向重力性反应的新机制

【字体: 时间:2025年09月30日 来源:Planta 3.8

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  本研究为解决植物生长素(IAA)降解途径的认知空白,通过功能分析发现拟南芥过氧化物酶AtPrx71具有IAA氧化酶活性。实验表明AtPrx71通过降解IAA抑制茎部伸长并延缓向重力性响应,其功能与杨树CWPO-C高度保守。该研究揭示了Prx介导的IAA代谢新通路,为维管植物生长调控机制提供了新视角。

  
植物生长素吲哚-3-乙酸(IAA)的代谢调控是植物发育研究的核心课题。虽然已知DAO(双加氧酶)、GH3(Gretchen Hagen 3)等酶参与IAA失活过程,但过氧化物酶(Prx)是否普遍参与IAA降解仍存在争议。早在20年前就有研究提示植物Prx可能具有IAA氧化酶活性,但除西葫芦CpPrx01外缺乏直接证据。杨树细胞壁结合过氧化物酶CWPO-C因其特殊的底物广谱性(既能催化木质素单体聚合又能降解IAA)引起关注,而拟南芥中与其序列相似度达68%的AtPrx71是否具有同等功能成为关键科学问题。
研究人员通过启动子驱动GUS报告基因、基因敲除(atprx71)和过表达(35S::AtPrx71)转基因株系构建,结合实时荧光定量PCR、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)和重力响应时序分析等技术,系统研究了AtPrx71的表达模式及其对IAA代谢、茎部发育和向重力性的调控作用。实验使用拟南芥哥伦比亚生态型(Col-0)为背景,通过农杆菌介导的 floral dip 法获得转基因植株。
AtPrx71表达模式与CWPO-C高度相似
通过PAtPrx71::GUS和PCWPO-C::GUS染色发现,AtPrx71在幼嫩组织中高表达:2天苗期的气孔和根(除根尖分生组织外)、3.5周龄植株茎上部3cm区域、6周龄植株花柱等部位均呈现强烈染色。与DR5::GUS( auxin响应启动子)染色对比发现,AtPrx71高表达区域与IAA积累部位高度重合,提示其可能参与IAA原位降解。
AtPrx71抑制茎伸长并调节IAA敏感性
atprx71突变体茎伸长比野生型(WT)提前2-3天,4.5周时茎长显著增加3.5cm;而过表达株系(35S::AtPrx71-1,2,6)茎长仅为WT的64-74%。外源IAA处理实验显示:0.01% IAA促进WT和atprx71茎伸长,0.1% IAA则抑制生长;但过表达株系对0.01% IAA无响应,0.1% IAA反而促进伸长13-22%,表明AtPrx71通过降解IAA维持最适浓度。
AtPrx71直接调控IAA积累
LC-MS/MS定量分析表明:atprx71茎尖IAA含量(106 ng g-1 FW)为WT(46 ng g-1 FW)的2.3倍,而过表达株系(26 ng g-1 FW)仅为WT的55%,证实AtPrx71以IAA为直接底物进行降解。
重力响应受AtPrx71-IAA通路调控
在水平放置实验中,atprx71完成90°弯曲仅需93分钟(WT需217分钟),而过表达株系需427分钟。外源IAA处理加剧表型差异:0.1% IAA使atprx71完全丧失向重力性,而WT和过表达株系仍保持浓度依赖性响应,证明IAA浓度阈值是重力响应的关键决定因素。
AtPrx71不影响细胞壁木质化
尽管AtPrx71与CWPO-C均具有木质素单体氧化活性,但6周龄植株茎基部木质素含量无显著差异。甲苯胺蓝和Wiesner(间苯三酚-HCl)染色显示,atprx71的木质化面积反而增加,说明其加速的茎伸长伴随细胞壁成熟进程加快,而非直接参与木质素聚合。
本研究证实AtPrx71通过降解IAA负调控茎部伸长和向重力性响应,其功能与杨树CWPO-C具有进化保守性。序列分析显示所有双子叶植物均存在氨基酸同一性>65%的同源Prx(如百脉根Lj6g001953、番茄Solyc01g105070),而单子叶植物同源性较低(水稻Os01g07770为61%),表明该机制在维管植物中广泛存在。该发现不仅完善了IAA代谢网络,为作物株型改良提供新靶点,更重新定义了过氧化物酶在植物发育中的生物学意义——不仅是细胞壁构建酶,更是生长调控的关键参与者。研究结果发表于《Planta》(2025年262卷108页),为植物激素调控领域提供了突破性视角。
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