白藜芦醇通过Syk信号通路调控巨噬细胞极化抑制口腔鳞癌侵袭迁移的机制研究

本研究揭示白藜芦醇（RES）通过抑制Syk信号通路磷酸化，重编程肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）从M2促瘤表型向M1抑瘤表型转化，并同时促进M1极化、抑制M2极化，从而显著抑制口腔鳞癌（OSCC）细胞的侵袭和迁移能力，为靶向TAMs的肿瘤免疫治疗提供了新策略。

　　

引言

口腔鳞状细胞癌（OSCC）是全球第六大常见恶性肿瘤，易发生颈部淋巴结转移，患者五年生存率低于50%。研究表明，OSCC的侵袭迁移与肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的极化表型密切相关。TAMs可分为M1（抗肿瘤）和M2（促肿瘤）两种表型，其中M2型TAMs在促进OSCC侵袭迁移中起关键作用，并与患者生存率显著相关。白藜芦醇（RES）是一种从葡萄、花生等植物中提取的无毒天然多酚化合物，既往研究证实其可通过调节氧化应激和葡萄糖代谢发挥抗肿瘤作用，但RES是否通过调控TAMs极化影响OSCC进展尚不明确。脾酪氨酸激酶（Syk）作为一种非受体酪氨酸激酶，近年被发现参与肿瘤进程，但其在TAM极化中的作用仍需探索。

材料与方法

研究采用人口舌鳞癌细胞系CAL27和小鼠腹膜巨噬细胞系RAW264.7。通过CAL27条件培养基（CAL27-CM）诱导RAW264.7细胞24小时获得M2型TAMs。采用CCK-8法检测RES对细胞活性的影响，确定20 μM为安全干预浓度。实验设置对照组、CAL27-CM组、重编程组（R-RES：CAL27-CM诱导24小时后更换含20 μM RES培养基）、RES同步处理组（RES与CAL27-CM同时添加）及Syk抑制剂GS-9937组。通过RT-qPCR、ELISA、Western blot、免疫荧光染色检测TAMs表型标志物（CD86、CD206）及细胞因子（TNF-α、IL-12、iNOS、IL-10、Arg-1、TGF-β）表达；Transwell和小室划痕实验评估CAL27细胞侵袭迁移能力；生物信息学分析采用GeneCards、SwissTargetPrediction、STRING数据库及TCGA数据集。

结果

CAL27-CM诱导TAMs向M2表型极化

CAL27-CM处理24小时后，巨噬细胞形态变大、伪足增多，分散性增强；免疫荧光显示M2标志物CD206荧光强度显著升高；RT-qPCR检测发现M2相关细胞因子IL-10、Arg-1及TGF-β mRNA表达随时间推移上调，24小时达峰值；ELISA证实IL-10蛋白分泌显著增加，表明CAL27-CM成功诱导M2型TAMs。

R-RES与RES通过TAMs抑制CAL27细胞侵袭迁移

CCK-8实验表明20 μM RES对巨噬细胞和TAMs活性无显著影响。Transwell和划痕实验显示：R-RES组（重编程干预）和RES组（同步干预）均可显著降低CAL27细胞的侵袭和迁移数量，表明RES通过调控TAMs极化间接抑制OSCC恶性行为。

R-RES重编程TAMs由M2向M1表型转化

RT-qPCR和ELISA结果显示：R-RES组M1标志物TNF-α、IL-12 mRNA及蛋白表达显著升高，iNOS mRNA轻微上调；M2标志物TGF-β、IL-10、Arg-1 mRNA及IL-10蛋白分泌显著降低。免疫荧光证实CD86（M1）荧光强度增强，CD206（M2）荧光减弱，表明R-RES有效逆转TAMs表型。

RES促进M1极化并抑制M2极化

同步干预实验（RES组）显示：TNF-α、IL-12、iNOS mRNA表达显著上升，TGF-β、IL-10、Arg-1 mRNA表达下降；ELISA检测到TNF-α分泌增加而IL-10减少；免疫荧光进一步验证CD86表达增强、CD206表达抑制，证实RES双向调控TAMs极化。

RES通过抑制Syk信号通路调控TAM极化

生物信息学筛选出41个RES-OSCC交叉靶基因，Syk位列关键蛋白前20。单细胞数据分析显示Syk在HNSCC组织巨噬细胞中高表达；TCGA数据库证实Syk在肿瘤组织中表达上调且与患者预后相关。Western blot显示R-RES组和RES组Syk总蛋白无变化，但磷酸化Syk（p-Syk）表达显著抑制。Syk抑制剂GS-9937干预实验表明：抑制Syk通路可促进M1标志物（TNF-α、IL-12、iNOS）表达，抑制M2标志物（IL-10、Arg-1）表达，并增强CD86、减弱CD206荧光强度；Transwell和划痕实验证明GS-9937处理后的TAMs条件培养基显著抑制CAL27细胞侵袭迁移。

讨论

本研究首次揭示RES通过双重途径调控TAMs极化：重编程M2向M1转化及同步促进M1/M2极化失衡。机制上，RES抑制Syk磷酸化，阻断其信号通路激活，从而逆转TAMs表型并抑制OSCC侵袭迁移。既往研究提示RES可能通过TLR4受体介导Syk/NF-κB或Syk/STAT3通路调控免疫微环境，本研究为这一假设提供了实验依据。尽管RES存在口服生物利用度低的局限性，但纳米载体递送系统可增强其靶向性和疗效，未来需在原发性TAMs及体内模型中验证其作用，并探索与CD8⁺ T细胞免疫应答的关联。靶向Syk的TAMs重编程策略为OSCC免疫治疗提供了新方向。

结论

RES通过抑制Syk信号通路磷酸化，重编程TAMs向M1抗肿瘤表型转化，并双向调控极化平衡，从而抑制OSCC侵袭迁移。该研究深化了对RES抗肿瘤机制的理解，为靶向TAMs的癌症治疗提供了理论依据和潜在靶点。