S100A6诱导EGFR 19外显子突变肺腺癌PC9细胞对吉非替尼耐药机制研究

本研究通过构建S100A6过表达肺腺癌PC9细胞模型，首次揭示S100A6能显著增强EGFR 19外显子突变细胞对吉非替尼（Gefitinib）的耐药性（P<0.05），并发现其对顺铂（Cisplatin）部分浓度/时间点也存在耐药促进作用，而对培美曲塞（Pemetrexed）、贝伐珠单抗（Bevacizumab）无显著影响。该发现为EGFR-TKI耐药机制提供了新的分子靶点。

　　

引言

肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因，2022年估计导致180万人死亡。非小细胞肺癌（NSCLC）占主要比例，其中肺腺癌（LADC）是最常见的亚型，具有高侵袭性和易转移特性。EGFR突变在亚洲人群中的发生率高达38.8–64.0%，其中19外显子缺失（E19 dels）和21外显子点突变（L858R）最为常见。酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）如吉非替尼对EGFR突变患者显示优异疗效，但耐药性问题日益突出。S100A6（钙周期蛋白）作为钙结合蛋白家族成员，在多种恶性肿瘤（包括肺腺癌）中高表达，但其在耐药机制中的作用尚未明确。

材料与方法

研究采用EGFR 19外显子突变的肺腺癌PC9细胞系及正常肺上皮细胞BEAS-2B。通过慢病毒载体构建S100A6过表达细胞株（PC9/S100A6），采用MTT法检测吉非替尼（0-100μmol/L）、顺铂（2.5-40μg/mL）、培美曲塞（0.04-25nmol/L）和贝伐珠单抗（0.0125-0.2μg/mL）在24h、48h、72h对细胞增殖的抑制率。使用qPCR和Western blot验证S100A6表达，数据分析采用SPSS 22.0和GraphPad Prism 7.0。

结果

顺铂抑制效果：顺铂对两组细胞均显示最强抑制作用。PC9/S100A6细胞在顺铂2.5μg/mL（48h、72h）和10μg/mL（72h）的抑制率显著低于PC9细胞（P<0.05），但其他浓度/时间点无显著差异。IC50值显示PC9/S100A6细胞耐药性增强（72h：PC9组1.903μg/mL vs PC9/S100A6组2.719μg/mL）。

贝伐珠单抗与培美曲塞：两者抑制率均低于50%，且两组间无显著差异，IC50无法计算。

吉非替尼抑制效果：吉非替尼在0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L浓度下，PC9/S100A6细胞在24h、48h、72h的抑制率均显著降低（P<0.05）。10μmol/L（48h、72h）和100μmol/L（72h）的抑制率也明显下降。IC50值显示PC9/S100A6细胞耐药性显著增强（48h：PC9组0.1403μmol/L vs PC9/S100A6组0.4998μmol/L）。

讨论

本研究首次证实S100A6过表达可特异性诱导肺腺癌PC9细胞对吉非替尼耐药，并对顺铂部分浓度/时间点产生耐药性。S100A6可能通过激活PI3K/AKT/mTOR等EGFR下游信号通路（与MET扩增、HER2扩增等机制协同）介导耐药。顺铂耐药机制可能涉及DNA加合物修复、抗凋亡信号激活等多因素作用。研究局限性在于过表达模型未能完全模拟内源性调控机制，需通过基因敲除等技术进一步验证因果关系。

结论

S100A6是肺腺癌EGFR-TKI耐药的新型调控因子，其机制可能与EGFR信号通路交叉对话相关，为克服靶向药物耐药提供了潜在干预靶点。