基于凝集素磁分离与重组酶辅助扩增(RAA-LMS)技术的食品中金黄色葡萄球菌快速精准检测新方法

本研究创新性地将凝集素磁分离技术(LMS)与重组酶辅助扩增(RAA)相结合，建立了食品基质中金黄色葡萄球菌(S. aureus)的高效检测体系。该方法通过麦胚凝集素(WGA)特异性捕获细菌，利用RAA实现核酸快速扩增，在40分钟内达到3.6×101 CFU/mL的检测灵敏度，较传统PCR方法提升3个数量级，为食源性致病菌监测提供了突破性技术方案。

　　

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Materials and reagent

羧基化磁珠(MBs)（10 mg/mL）购自上海玄元纳米科技有限公司。1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺钠盐(NHSS)由阿拉丁试剂（上海）提供。链霉亲和素(SA)购自上海华兰化学技术有限公司。生物素标记小麦胚凝集素(biotin-WGA)源自小麦胚芽，可特异性结合细菌表面的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)及其衍生物。

The principle of RAA-LMS assay for S. aureus detection

如图1所示，本研究采用WGA通过疏水作用、静电作用和氢键识别并捕获金黄色葡萄球菌。加入链霉亲和素修饰磁珠(MBs-SA)后，利用生物素-链霉亲和素系统的高亲和力，在外磁场作用下将细菌-凝集素复合物从食品基质中分离。去除磁珠后提取DNA模板，通过RAA反应在39°C下进行20-40分钟核酸扩增，最终通过荧光信号实现检测。该设计有效消除了食品基质干扰，显著提升了检测效率。

Conclusions

本研究建立的RAA-LMS检测方法大幅缩短了检测时间，同时消除了样品基质干扰。该方法在纯培养体系中对金黄色葡萄球菌的检测限(LOD)为3.6×10¹ CFU/mL，在加标桃汁中为1.15×10³ CFU/mL，在加标脱脂乳中为4.4×10⁵ CFU/mL，表明食品组分对检测结果存在影响。未来可通过优化样品前处理流程进一步提升检测性能。该技术为食源性疾病的快速监测提供了有效解决方案。