环状RNA circ_HOMER3通过TNF/MAPK9-NCOA4轴协同调控牛乳腺上皮细胞炎性损伤与铁死亡的作用机制

本研究首次揭示circ_HOMER3通过激活TLR4/MyD88/NF-κB通路促炎性因子（IL-6/IL-8/IL-1β）释放，协同调控JAK1/STAT1介导的凋亡与TNF/MAPK9-NCOA4轴驱动的铁死亡（表现为Fe2+/Fe3+积累、MDA/LPO升高及GSH/SOD耗竭），为牛乳腺炎（bovine mastitis）提供了新型circRNA靶向治疗策略。

　　

Section snippets

Cell culture and transfection

牛乳腺上皮细胞（bMECs）由宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室提供，使用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F-12培养基在37°C、5% CO₂条件下培养。实验均采用第5-8代细胞，所有操作均设置三个独立生物学重复。

Identification and expression characteristics of circ_HOMER3

通过重新分析大肠杆菌感染牛乳腺组织的高通量测序数据，发现circ_HOMER3（原名circ_0018087）表达显著上调（log₂FC = 2.0425, P= 7.8949 × 10^?57）。qPCR验证其在乳腺炎组织中表达升高，且与促炎因子IL-6、IL-8、IL-1β表达呈正相关（图1A），提示其可能参与乳腺炎进程。

Molecular mechanisms of circ_HOMER3 in inflammatory injury and apoptosis

本研究证明circ_HOMER3通过多通路调控LPS诱导的bMECs炎性损伤：激活TLR4/MyD88/NF-κB级联反应，促进IκBα降解和p65核转位，从而上调促炎因子表达。这一机制与反刍动物保守的炎症调控模式一致。

Conclusion

本研究系统阐明了circ_HOMER3在LPS诱导bMECs炎性损伤中的调控作用：通过TLR4/NF-κB通路促进炎性因子释放，经JAK1/STAT1通路调控BAX/BCL-2比率和caspase激活以促凋亡，并通过MAPK9依赖的NCOA4调控放大铁死亡进程。