Sirtuin6通过调控氧化应激和自噬抑制柯萨奇病毒B3诱导心脏内皮细胞内皮-间质转化的研究

《Immunity, Inflammation and Disease》：Inhibitory Effect of Sirtuin6 on EndMT by Regulating Oxidative Stress and Autophagy in Coxsackievirus B3-Induced Cardiac Endothelial Cells

本文揭示了Sirt6在柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导的病毒性心肌炎（VMC）中通过调控氧化应激（ROS/MDA/SOD）和自噬（LC3B-II/Beclin-1/p62）通路抑制内皮-间质转化（EndMT）的新机制。研究发现Sirt6下调会加剧CVB3引起的内皮细胞凋亡（Bax/Bcl-2/Caspase-3）和表型转化（VE-cad/α-SMA），而Sirt6过表达可逆转这些病理改变，为VMC治疗提供了新靶点。

　　

Sirt6在CVB3诱导心脏内皮细胞EndMT中的表达特征

研究通过CCK-8检测确定CVB3感染小鼠心脏内皮细胞（MCECs）2小时为最佳感染时长。Western blot和免疫荧光显示CVB3感染后内皮标志物VE-cadherin（VE-cad）显著下调，间质标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）上调，证实EndMT发生。值得注意的是，Sirt6在mRNA和蛋白水平均显著下调，提示其可能参与EndMT调控。

Sirt6对CVB3诱导EndMT的抑制作用

通过慢病毒载体成功构建Sirt6 knockdown（sh-Sirt6）和过表达（oe-Sirt6）模型。实验发现sh-Sirt6+CVB3组较sh-NC+CVB3组出现更显著的α-SMA上调和VE-cad下调，而oe-Sirt6可部分逆转CVB3引起的表型转化。这表明Sirt6是抑制CVB3诱导EndMT的关键保护因子。

Sirt6对MCECs凋亡的调控作用

在CVB3感染72小时后，Sirt6敲低组细胞活力进一步下降，凋亡率显著升高。Western blot显示sh-Sirt6+CVB3组促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达上调，抗凋亡蛋白Bcl-2下调，而Sirt6过表达可缓解这些变化。这表明Sirt6通过调控Caspase-3依赖的凋亡通路发挥细胞保护作用。

蛋白质组学揭示Sirt6的调控网络

对Sirt6敲低MCECs的蛋白质组学分析鉴定出336个差异表达蛋白（DEPs）。GO分析显示Sirt6参与炎症信号、内皮凋亡、DNA损伤修复和氧化磷酸化等过程。KEGG和Reactome通路分析提示糖代谢和生物氧化途径异常，为后续氧化应激研究提供线索。

Sirt6通过氧化应激-自噬轴调控EndMT

实验证实CVB3感染导致活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平升高，超氧化物歧化酶（SOD）活性降低。Sirt6敲低加剧这种氧化应激状态，而过表达可有效缓解。同时自噬标志物LC3B-II和Beclin-1在感染后下调，p62积累，表明自噬受抑。Sirt6表达水平与自噬活性呈正相关，提示Sirt6可能通过调节氧化应激与自噬的平衡来抑制EndMT进展。

本研究首次阐明Sirt6在CVB3诱导的EndMT中通过调控氧化应激-自噬轴发挥保护作用，为理解病毒性心肌炎的内皮功能障碍机制提供了新视角，同时提示Sirt6可能成为VMC治疗的潜在靶点。