栀子花（Gardenia jasminoides）的果提取物能够缓解MC903诱导的特应性皮炎，并通过调节STAT6的磷酸化作用，减少IL-4/IL-13引起的紧密连接破坏和炎症
《Journal of Ethnopharmacology》：Gardenia jasminoides fruit extract alleviates MC903-induced atopic dermatitis and reduces IL-4/IL-13-induced tight junction disruption and inflammation by regulating the phosphorylation of STAT6
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Gardenia jasminoides果提取物通过抑制JAK-STAT6信号通路减轻炎症并修复皮肤屏障，在角质形成细胞、3D皮肤模型和MC903诱导的小鼠AD模型中均验证了其抗炎及屏障修复机制。
彭旭|万瑶颖|金晓丽|袁永雷|马洪宇|王一春|王菲菲|曲丽萍
云南特色植物提取实验室有限公司，中国昆明，650106
摘要
民族药理学相关性
Gardenia jasminoides Ellis的果实属于茜草科植物，最早记载于《神农本草经》，并在传统中医中得到应用。药理学研究表明，Gardenia具有保护肝脏和胆囊、降低血糖、促进胰腺分泌、保护胃功能、降低血压、调节血脂、神经保护、抗炎、抗氧化、抗疲劳和抗血栓等作用。此外，G. jasminoides果提取物（GJFE）可以缓解特应性皮炎的症状，但其具体作用机制尚不明确。
研究目的
本研究旨在探讨GJFE通过何种潜在机制和信号通路在角质形成细胞、三维（3D）表皮模型和小鼠模型中缓解特应性皮炎（AD）。
方法
我们使用角质形成细胞和3D表皮模型建立了IL-4和IL-13诱导的特应性皮炎模型。同时，通过连续8天在小鼠耳部涂抹MC903（钙调甾醇）来诱导特应性皮炎模型。通过Western blotting、定量聚合酶链反应、免疫荧光和网络药理学验证了GJFE和栀子苷对炎症和皮肤屏障损伤的作用。为进一步阐明相关分子机制，我们使用了小干扰RNA和小分子抑制剂来研究OVOL1、信号转导子和转录激活因子6（STAT6）以及紧密连接蛋白之间的关系。
结果
我们的研究结果表明，GJFE可通过抑制炎症和修复皮肤屏障来缓解特应性皮炎。具体而言，它能够抑制关键炎症细胞因子和趋化因子的表达，包括IL-24、IL-33和CCL26。同时，它还能促进维持皮肤屏障完整性的蛋白质（如CLDN1、CLDN4和OVOL1）的表达。这些效应是通过JAK-STAT6信号通路介导的。此外，我们发现STAT6的磷酸化对于调节下游紧密连接蛋白至关重要，且OVOL1可以影响CLDN1和CLDN4的表达。
结论
我们的研究表明，Gardenia jasminoides果提取物可通过调节STAT6的磷酸化来缓解MC903诱导的特应性皮炎，并减少IL-4/IL-13引起的紧密连接蛋白损伤和炎症。这些发现为GJFE在治疗特应性皮炎方面的潜在应用提供了初步实验证据，尤其是在其抗炎和修复皮肤屏障功能方面。
引言
特应性皮炎（AD）是一种常见的炎症性皮肤病，全球约有2%-10%的年轻人和高达20%的儿童受到影响（Mortz等人，2015年）。该疾病给患者及其家庭带来巨大的身体和心理负担，其特征是免疫失调、剧烈瘙痒和皮肤屏障功能受损（Furue等人，2017年；St?nder，2021年）。皮肤屏障功能障碍是AD的标志，与病变皮肤中TJ蛋白（如occludin（OCLN）、连接粘附分子A（JAM1）、CLDN1和CLDN4）的表达减少密切相关（Wang等人，2024年）。
AD中的免疫失调与T辅助细胞介导的免疫反应失衡密切相关，特别是Th1、Th2、Th17和Th22细胞（St?nder，2021年；Ma等人，2014年）。多项先前的研究表明，通过Th2介导的免疫反应释放的白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）是AD发生的重要因素（Esaki等人，2015年；Esaki等人，2016年）。这些细胞因子会破坏皮肤屏障功能，产生炎症因子并引发瘙痒（Steinhoff等人，2022年）。具体而言，IL-4和IL-13与IL-4受体α和IL-13受体α1复合体相互作用，从而激活JAK1/TYK2/JAK2信号通路。这种激活会导致STAT6和STAT3的磷酸化（Wollenberg等人，2020年；Huang等人，2022年）。IL-4/IL-13-STAT3/STAT6信号通路在下调丝聚蛋白（FLG）表达、破坏皮肤屏障以及上调IL-33、IL-25和胸腺基质淋巴生成素（TSLP）在角质形成细胞中的表达方面起着关键作用（Furue，2020年）。此外，研究还表明IL-13可通过抑制AHR–OVOL1–FLG轴来损害AD中的皮肤屏障（Tsuji等人，2017年；Furue等人，2019年）。还有研究指出AHR通路和ROS参与了IL-4和IL-13对OCLN、CLDN1和CLDN4表达的下调（Wang等人，2024年）。然而，IL-4和IL-13破坏皮肤屏障的具体机制仍有待阐明。例如，目前尚不清楚OVOL1是否能够调节TJ相关蛋白，从而影响皮肤屏障功能。
Gardenia jasminoides的果实（中文称为“栀子”）属于茜草科，分布于中国东部、西南部和中南部地区，含有丰富的生物活性化合物（Jin等人，2023年；Xiao等人，2017年）。作为一种传统中药，它最早记载于《神农本草经》（Chen等人，2020年）。传统上，它被收录在中国药典中，具有清热解毒、镇静安神、利尿降温等功效（中国药典委员会，2015年；Chen等人，2020年；Feng等人，2014年）。在日本和韩国传统医学中，这种草药长期以来被用于退烧，并具有利胆、促进消化、利尿和抗炎作用（日本药典，2001年；韩国草药协会，1991年；Arai等人，2004年；Ohwada等人，2009年）。
药理学研究还表明，G. jasminoides具有保护肝脏和胆囊（Fang等人，2022年）、降低血糖（Zhou等人，2023年）、促进胰腺分泌（Ye等人，2021年）、保护胃功能（Lee等人，2009年）、降低血压（Chen等人，2017年）、调节血脂（Lv等人，2024年）、神经保护（Ren等人，2016年）以及抗炎（Oliveira等人，2017年；Zhang等人，2022年）、抗氧化（Hu等人，2019年）、抗疲劳和抗血栓（Debnath等人，2011年；Pyun等人，2021年）等作用。此外，包括G. jasminoides果提取物（GJFE）在内的多种中药可以显著缓解AD的发生。值得注意的是，这些研究表明G. jasminoides提取物可以改善皮肤屏障并调节Th2免疫反应，从而改善DfE诱导的小鼠AD（Park等人，2022年）。另外，不含番红花素的G. jasminoides提取物可以通过抑制DfE诱导的NC/Nga小鼠中的Th2相关细胞因子产生来减轻类似AD的皮肤症状（Park等人，2019年）。然而，GJFE缓解AD的具体机制尚未完全明确。在本研究中，我们证明了GJFE可以通过抑制JAK/STAT6信号通路来修复皮肤中的TJ损伤。在HaCaT细胞、NHEK细胞和三维（3D）皮肤模型中，GJFE和栀子苷均有效抑制了IL-4/IL-13诱导的STAT6磷酸化。这种抑制作用进一步抑制了IL-33和IL-24的表达，同时促进了CLDN1和CLDN4的表达，从而有助于皮肤屏障修复和炎症反应的抑制。
GJFE的制备和高效液相色谱（HPLC）分析
G. jasminoides果实材料来源于中国云南省昆明市，其分类鉴定由中国科学院昆明植物研究所的刘海阳博士完成。经过鉴定的标本（编号JY20230809-2）永久保存在中国上海吉研生物医药发展有限公司的数据库中。共称量了100克G. jasminoides果实，干燥后用10体积的溶剂提取两次
GJFE成分分析
栀子色素可能导致不同批次提取物外观的显著差异。因此，在制备栀子果提取物时，仅收集了极性较高的组分。通过与标准化合物的比较，HPLC分析显示其中几乎不含栀子中的常见成分番红花素，而主要色谱峰为栀子苷。定量分析显示
讨论
AD是一种复杂的疾病，其病理生理机制涉及多种因素（Weidinger等人，2018年）。AD的病因被认为与免疫反应和皮肤屏障基因的紊乱有关，包括先天性和适应性免疫机制的失调，以及细胞因子的释放和各种环境因素（Honda和Kabashima，2020年）。许多与AD病理生理相关的细胞因子，如IL-33、IL-24、IL-4、IL-13和TSLP，通过JAK–STAT通路发挥作用
结论
GJFE及其成分栀子苷通过抑制STAT6的磷酸化、抑制炎症细胞因子（IL-24、IL-33、CCL26）的产生以及上调TJ相关蛋白（CLDN1、CLDN4和OVOL1）来缓解AD（图12）。这些效果在角质形成细胞、3D表皮模型和MC903诱导的AD小鼠中得到了验证，突显了GJFE作为AD天然治疗剂的潜力。这些发现为GJFE的抗炎作用提供了新的分子机制见解
作者贡献声明
王菲菲：资源获取、概念设计。王一春：方法学、数据管理。马洪宇：方法学、数据管理。万瑶颖：撰写初稿、方法学、数据管理。彭旭：撰写初稿、项目管理、方法学、资源获取、数据管理。袁永雷：方法学、数据管理。金晓丽：方法学、数据管理。曲丽萍：监督、资源获取、概念设计未引用参考文献
Furue, 2020; Honda and Kabashima, 2020; Kiyomatsu-Oda et al., 2018; Leung, 2013; Ma et al., 2014; McCormick and Heller, 2015; Nikhil and Emma, 2014; Wolf and Wolf, 2018.
资助
本研究得到了云南特色植物提取实验室独立研究项目基金（2025YKZY004, 2025YKZY009）的支持
利益冲突声明
? 作者声明没有可能影响本文研究的已知财务利益或个人关系。
