《ACS Nano》：Albumin Nanoparticles Co-Loaded with Dual Drugs for Enhanced Ferroptosis-Based Cancer Therapy through Modulating Cholesterol Metabolism
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本文开发了共载阿伐麦布（Ava）与金诺芬（Aur）的人血清白蛋白纳米粒（HSA@Aur&Ava），通过抑制胆固醇酰基转移酶1（SOAT1）破坏脂筏结构，协同硫氧还蛋白还原酶抑制剂Aur诱导的铁死亡过程。该纳米粒可显著提升脂质过氧化物积累，引发免疫原性细胞死亡（ICD），并促进树突状细胞（DCs）成熟与CD8+T细胞浸润，在4T1荷瘤模型中展现出显著抑瘤效果及长效免疫记忆功能，为基于胆固醇代谢调控的肿瘤 chemoimmunotherapy 提供了新策略。
合成、表征与体外细胞毒性
通过一锅法成功构建了共载Aur与Ava的人血清白蛋白纳米粒（HSA@Aur&Ava）。透射电镜显示纳米粒尺寸均匀（50-100 nm），傅里叶变换红外光谱证实药物成功包载。纳米粒在酸性环境中呈现pH响应性释药特性，动态光散射显示其流体动力学直径约为350 nm。体外细胞实验表明，双药纳米粒对4T1肿瘤细胞具有显著协同杀伤作用（IC50=19.81 μg mL–1），且对正常L929细胞毒性较低。流式细胞术检测显示HSA@Aur&Ava处理组细胞凋亡率高达70.6%。
体外铁死亡诱导机制
通过铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）验证发现，纳米粒的细胞毒性可被显著逆转，表明铁死亡为主要细胞死亡方式。纳米粒处理导致细胞内谷胱甘肽（GSH）和半胱氨酸（Cys）水平显著下降，谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达降低，活性氧（ROS）和脂质过氧化物积累增加。JC-1染色与生物透射电镜显示线粒体膜电位崩溃、嵴结构破坏，C11-Bodipy染色进一步证实脂质过氧化水平升高。
体外免疫原性细胞死亡与胆固醇代谢重编程
HSA@Aur&Ava处理促进ATP和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）释放，并增强钙网蛋白（CRT）在细胞膜表面的暴露，表明免疫原性细胞死亡（ICD）被激活。胆固醇代谢分析显示，Ava通过抑制SOAT1降低胆固醇酯水平，增加游离胆固醇，激活肝X受体α（LXRα）及其下游胆固醇外排蛋白ABCA1的表达。FITC-霍乱毒素B（CTB）染色显示脂筏标志物GM1减少，证实脂筏结构被破坏。划痕实验表明纳米粒可有效抑制肿瘤细胞迁移。
转录组学分析
RNA测序发现HSA@Aur&Ava处理组共有6503个差异表达基因，KEGG富集分析显示铁死亡、MAPK、TNF及T细胞受体信号通路显著激活。GO分析表明基因功能集中于凋亡、代谢、免疫应答及氧化应激反应，从分子层面证实纳米粒通过代谢-免疫交叉调控增强抗肿瘤效果。
体内生物分布与抗肿瘤疗效
纳米粒在肿瘤部位富集峰值出现在注射后6小时，且具有良好血液相容性。在4T1荷瘤小鼠模型中，HSA@Aur&Ava治疗组肿瘤生长显著抑制，肿瘤组织内GPX4与SOAT1表达下降，ABCA1表达上升。H&E染色显示肿瘤细胞广泛坏死，主要器官未发现明显损伤。免疫荧光显示肿瘤内CD8+T细胞浸润显著增加。
体内抗肿瘤免疫与免疫记忆形成
流式细胞术分析表明，纳米粒处理组淋巴结中成熟DCs（CD80+CD86+）比例上升，肿瘤内CD8+T细胞及其分泌的TNF-α与IFN-γ水平显著提高，记忆T细胞（CD62L–CD44+）数量增加。肿瘤再攻击实验中，预处理小鼠的二次肿瘤生长被明显抑制，证明纳米粒可诱导长效抗肿瘤免疫记忆。
结论
HSA@Aur&Ava纳米粒通过破坏胆固醇代谢稳态增强铁死亡效应，并激活系统性抗肿瘤免疫，为基于代谢调控的肿瘤联合治疗提供了新思路。
