《Journal of Taibah University for Science》：WWP2 promotes the proliferation and metastasis of NSCLC through Hippo pathway and Wnt pathway
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本文系统阐述了E3泛素连接酶WWP2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的致癌机制，发现其通过泛素化降解NF2蛋白抑制Hippo通路，促进YAP核转位并与β-catenin形成转录复合物，协同激活Wnt通路及上皮-间质转化（EMT），为NSCLC靶向治疗提供了新视角。
WWP2在非小细胞肺癌中的表达与临床意义
免疫组织化学检测113例临床样本发现，WWP2在非小细胞肺癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织。统计分析显示WWP2高表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移显著相关，而与患者年龄、性别及肿瘤分化程度无关。Western blot实验证实WWP2在A549、H1299、H1975、H460和PC9等肺癌细胞系中蛋白水平均高于正常支气管上皮细胞HBE。免疫荧光染色显示WWP2主要定位于细胞核，胞质中亦有分布。Kaplan-Meier生存分析提示WWP2高表达与肺癌患者不良预后密切相关。
WWP2对非小细胞肺癌细胞恶性表型的调控功能
通过功能获得性（质粒过表达）和功能缺失性（siRNA干扰）实验验证WWP2的致癌作用。在A549和H1299细胞中过表达WWP2后，集落形成实验和CCK-8检测显示细胞增殖能力增强；Transwell实验表明细胞迁移能力提升。相反，在H1299和H1975细胞中干扰WWP2表达后，细胞增殖和迁移能力均受到抑制。这些结果证明WWP2能够促进非小细胞肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。
WWP2与Hippo通路核心蛋白的相互作用机制
基于WWP2含有四个WW结构域的特性，研究通过免疫荧光共定位实验发现WWP2与NF2/Merlin在A549、H1299和H1975细胞中存在共定位。免疫共沉淀实验进一步证实WWP2不仅与Merlin直接结合，还能与Hippo通路核心组分MST1/2、SAV1和LATS发生相互作用。STRING和GEPIA数据库分析显示WWP2表达与Hippo通路关键分子（LATS、YAP等）显著相关，提示WWP2可能通过蛋白质相互作用网络调控Hippo信号转导。
WWP2通过泛素化降解NF2抑制Hippo通路
作为E3泛素连接酶，WWP2通过泛素-蛋白酶体途径降解NF2/Merlin蛋白。在A549和H1299细胞中过表达WWP2后，Western blot检测显示Merlin蛋白水平下降，同时Hippo通路上游组分MST1/2、SAV1以及磷酸化LATS（p-LATS）和磷酸化YAP（p-YAP）水平降低，而总LATS、总YAP及下游靶基因CTGF表达升高。反之，干扰WWP2表达后，Merlin蛋白积累，p-LATS和p-YAP水平上升，总YAP和CTGF表达下降。免疫荧光实验直观显示WWP2过表达促进YAP核转位。这些结果证明WWP2通过降解NF2抑制Hippo通路活性，导致YAP去磷酸化并入核发挥转录共激活功能。
WWP2激活Wnt通路并促进上皮-间质转化
机制研究表明，核定位的YAP与β-catenin直接相互作用形成转录复合物，协同激活c-Myc、Cyclin D1和MMP7等靶基因表达。Western blot实验显示WWP2过表达虽降低活性形式β-catenin（非磷酸化）水平，但增加总β-catenin蛋白量并促进其核转位，上调Wnt通路下游靶点。qPCR检测证实CTGF、Axin2、Cyclin D1和MMP7基因表达同步上调。在EMT表型分析中，WWP2过表达导致上皮标志物ZO-1和E-cadherin下调，间质标志物N-cadherin、Vimentin及转录因子Snail、Slug上调；干扰WWP2则呈现相反趋势，证明WWP2通过Hippo-Wnt通路交叉对话驱动上皮-间质转化进程。
讨论与展望
本研究首次揭示WWP2作为E3泛素连接酶通过降解NF2抑制Hippo通路，进而通过YAP/β-catenin复合物激活Wnt信号和EMT程序的双重机制。WWP2表达与肺癌恶性进展及不良预后相关，提示其可作为NSCLC预后生物标志物和潜在治疗靶点。尽管研究发现WWP2与Hippo通路多组分存在相互作用，但其对Wnt通路的精确调控机制及在肿瘤微环境重塑中的作用仍需深入探索。靶向WWP2-Hippo-Wnt信号轴可能为晚期非小细胞肺癌的治疗提供新策略。
