《mSphere》：Genomic and phenotypic analysis of ST25 A. baumannii identifies virulence-associated clades and capsular/outer core locus types
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本研究通过整合基因组学与表型分析，系统揭示了ST25鲍曼不动杆菌（A. baumannii）的毒力特征。研究发现ST25分离株可分为四个进化枝（Clade I-IV），其中Clade IVb和IVd表现出最强的毒力表型，包括对氧化应激（H2O2）、干燥环境和血清的高抵抗力，以及在大蜡螟（Galleria mellonella）感染模型中的高致死性。研究首次明确了荚膜位点（KL）14型与外核心位点（OCL）6型与多重应激耐受性显著相关，并发现AdeB/AdeJ外排泵（Efflux Pumps）表达水平与氧化应激耐受性呈正相关。该研究为理解ST25菌株的环境适应性与致病潜力提供了关键分子基础。
基因组学与表型分析揭示ST25鲍曼不动杆菌的毒力特征
系统发育结构与KL/OCL分型
通过核心基因组多位点序列分型（cgMLST）对203株ST25鲍曼不动杆菌基因组进行分析，揭示了四个明确的进化枝：CI（20个基因组）、CII（48个基因组）、CIII（27个基因组）和CIV（108个基因组）。其中CIV进化枝可进一步划分为IVa（1个基因组）、IVb（20个基因组）、IVc（31个基因组）和IVd（56个基因组）四个亚枝。荚膜位点（KL）分型显示KL14为优势型别，占全部基因组的47%，主要分布于CIV（80%）和CII（20%）进化枝。外核心位点（OCL）分型表明OCL6（50%）、OCL5（35%）和OCL10（9.8%）为主要型别。值得注意的是，动物来源的菌株主要集中于CII、CIVb和CIVd进化枝，且33/36株携带KL14/OCL6组合，提示该基因型可能具有宿主适应性优势。
毒力基因组的生物信息学分析
对127个毒力相关基因的系统筛查显示，ST25基因组中广泛存在与生物膜形成（csu菌毛、bap-3）、粘附（pil/fim基因）、外排泵（adeABC、adeIJK系统）、铁摄取（hemO簇）和外毒素（plcD、cpaA）相关的基因。泛基因组分析将基因家族划分为持久性（3,084个基因）、壳层（2,118个基因）和云层（3,597个基因）三部分。其中壳层基因中发现CII进化枝特有的酒石酸代谢基因簇，而CIV进化枝则富集噬菌体相关基因，这些附属基因组元件可能贡献于菌株的环境适应性进化。
表型毒力特征解析
通过大蜡螟幼虫感染模型评估40株代表性菌株的毒力，发现CIVb和CIVd菌株表现出最强致病性，其半数致死量（LD50）和90%致死量（LD90）显著低于其他进化枝（P<0.01）。KL14/OCL6基因型与高毒力显著相关（Cramer's V=0.94）。生物膜形成实验显示，19/40株菌株为中等形成能力，其中KL14/OCL5和KL139/OCL6基因型菌株生物膜产量最高。干燥存活实验表明CIII、CIVb和CIVd菌株可存活50-60天，显著长于CI/CII菌株（30天），且KL14/OCL6和KL139/OCL6基因型菌株表现出最强耐受性。
应激耐受机制与外排泵调控
氧化应激实验中，CIVb和CIVd菌株在150μM H2O2暴露8小时后仍维持108CFU/mL活菌数，而CIII和CIVc菌株在2-6小时内即被清除。血清抗性实验显示除CIVc菌株外，其余进化枝菌株在20%血清中作用60分钟后仍保持107-108CFU/mL存活率。通过构建ATCC 19606菌株的外排泵基因敲除株（ΔadeB、ΔadeJ、ΔaceI、ΔamvA），发现ΔadeB和ΔadeJ突变体对H2O2敏感性显著增加。实时定量PCR（RT-qPCR）证实CIVb/d菌株在氧化应激条件下adeB/adeJ表达上调80倍，且表达水平与耐受性呈正相关（Spearman P<0.05）。
基因型-表型关联与进化意义
研究首次系统论证了KL/OCL基因型与ST25菌株表型特征的关联：KL14/OCL6型兼具高毒力与多重应激耐受性，KL14/OCL5型专精于生物膜形成，而KL139/OCL6型则在生物膜与环境适应性间取得平衡。进化分析显示CIV进化枝作为最新演化的分支，同时携带碳青霉烯酶基因和噬菌体衍生基因，提示其通过基因水平转移加速了环境适应与耐药性进化。外排泵系统（特别是AdeABC和AdeIJK）被证实是调控氧化应激应答的关键枢纽，为针对毒力因子的抗菌策略提供了新靶点。
结论与展望
本研究通过多组学整合分析揭示了ST25鲍曼不动杆菌的毒力进化格局，明确了KL14/OCL6等高危基因型的分子标志地位。研究发现毒力表型差异主要受进化枝特异性基因库调控，而非菌株来源差异。外排泵系统在应激耐受中的核心作用为理解细菌环境持久性提供了新视角。未来研究可聚焦于KL/OCL分子结构对外排泵功能的调控机制，以及针对应激应答通路的抗毒力治疗策略开发。
