《International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife》：Molecular detection of vector-borne and hemotropic pathogens in raccoons (
Procyon lotor) from a tropical ecotourism area in Costa Rica.
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本文首次在热带生态旅游区浣熊中系统性检测多种媒介传播及血源性病原体，通过实时/常规PCR技术发现Anaplasmataceae（31.6%）、犬细小病毒（CPPV-1，42.9%）和支原体（Mycoplasma spp.，28.6%）的分子证据，并全球首次在浣熊中鉴定出犬血支原体（M. haemocanis）。研究揭示了高旅游强度环境下野生动物-家养动物-人类界面病原体传播风险，为热带地区"一体健康"（One Health）监测提供关键数据。
引言：生态旅游区的病原体交换热点
在哥斯达黎加曼努埃尔安东尼奥国家公园（MANP）这片年接待超40万游客的热带生态旅游区，浣熊（Procyon lotor）因其亲人性行为和适应能力，成为野生动物-家养动物-人类界面病原体交换的关键媒介。2010年Keesing等学者指出，生物多样性丰富的热带地区在人为压力下更易发生病原体外溢事件。尽管此前对哥斯达黎加都市区浣熊的病原体研究较多（Baldi等2016，2019；Meneses等2016），但对保护环境下的种群健康数据仍存空白。
研究方法：从样本采集到分子检测的精准设计
2012-2022年间，研究团队通过汤姆哈克陷阱成功捕获19只野生浣熊（成体15只/幼体4只，雄性14只/雌性5只）。采用替来他明-唑拉西泮（Zoletil?）麻醉后，从颈静脉等部位采集EDTA抗凝血用于病原体DNA提取。分子检测采用实时荧光定量PCR（qPCR）与常规PCR相结合的策略：针对Anaplasmataceae家族16S rRNA基因（Li等2001）、立克次体gltA基因（Stenos等2005）及CPPV-1病毒VP2基因（Balboni等2018）进行初筛，阳性样本（Ct值<35）进一步通过巢式PCR扩增groEL（Alberti等2005）、16S rRNA（Zobba等2014）等靶基因进行确认。
发现与突破：病原体谱系与全球首例鉴定
检测结果显示，6/19（31.6%）个体携带Anaplasmataceae病原体，6/14（42.9%）携带CPPV-1病毒DNA，4/14（28.6%）检出支原体属病原体。尤为重要的是，通过16S rRNA基因测序（GenBank登录号PX794531）首次在全球范围内鉴定出浣熊携带犬血支原体（Mycoplasma haemocanis），与墨西哥野犬源菌株（MN294708）核苷酸同源性达99%。五只浣熊存在双重感染现象，而所有样本中立克次体与锥虫检测均为阴性。
流行病学模式：性别与年龄的差异显现
分层分析揭示感染率差异：Anaplasmataceae与CPPV-1仅见于雄性个体（雄性感染率42.9%/50.0%，雌性0%），幼体感染率（50.0%）高于成体（26.7%）；而支原体感染在两性间分布均衡（雄性25.0%，雌性50.0%）。这种差异可能源于行为模式（如活动范围）或媒介暴露机会的不同，为后续传播动力学研究提供线索。
临床意义：亚临床感染与血液学参数
尽管常见白细胞图谱异常（14/19出现白细胞增多/中性粒细胞增多），但血液学变化与PCR阳性无显著关联。天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和肌酸激酶（CK）升高普遍存在，主要归因于捕捉应激而非感染因素。这表明病原体携带多呈亚临床状态，凸显野生动物作为无症状携带者的流行病学意义。
讨论：生态界面下的病原体传播网络
42.9%的CPPV-1检出率显著高于欧洲浣熊种群（德国7.8%，Reinhardt等2023），可能反映当地流浪犬群的高流行率（Vieira等2015；Beus等2024）导致的跨物种传播。Anaplasmataceae的qPCR阳性而常规PCR阴性结果，提示低病原体载量或新型菌株存在的可能性（Silaghi等2016）。犬血支原体的跨物种检测证实了血源性病原体在共生野生动物与家养动物间的传播潜力（Maggi等2013）。
局限与展望：一体化监测的必要性
本研究未进行蜱虫等媒介昆虫采样，限制了传播途径的精确解析。未来需结合媒介监测、家养动物筛查及人类健康数据，构建热带生态旅游区病原体传播网络模型。尽管样本量有限，但为高人类活动压力下的野生动物健康监测建立了方法论范式。
结论：一体健康框架下的持续监测
曼努埃尔安东尼奥的浣熊种群作为"哨兵物种"，揭示了热带保护地内媒介传播与血源性病原体的复杂循环。全球首例犬血支原体的发现，凸显了生态旅游区跨物种传播风险。这项研究强调，在人与自然交互日益紧密的当下，实施整合野生动物-家养动物-人类-环境的一体健康（One Health）监测，是预警新发传染病的关键策略。
