2018-2024年中国犬病毒性传染病分子流行病学调查：十种病原的流行规律与疫苗保护效应评估

《Frontiers in Veterinary Science》：Molecular detection of canine viral infectious diseases in China: an investigation from 2018 to 2024

本综述系统分析了2018至2024年间中国22个省份2492份犬样本中十种病毒性病原的流行情况。研究揭示了CPV-2、CCoV、CDV的高感染率（49.6%总阳性率）及其显著的季节、地域和年龄差异特征。通过血清学检测（HI和病毒中和试验）发现现有疫苗对CPV-2、CDV的保护率较高（76.9%, 72.1%），但对CPIV的保护率不足（49.0%）。基因进化分析表明当前流行株CPV-2c（80%）和CPIV亚洲谱系与疫苗株存在遗传差异，为疫苗优化和精准防控提供了关键科学依据。

　　

1 引言

随着中国宠物犬数量的持续增长，犬传染病的传播风险日益引起关注。犬瘟热病毒（CDV）和犬细小病毒2型（CPV-2）因其高发病率和高死亡率成为犬类主要致死原因，并对野生动物构成严重威胁。本研究旨在系统调查2018至2024年间中国犬群中十种主要病毒病原的流行状况，包括CPV-2、犬冠状病毒（CCoV）、CDV、犬疱疹病毒1型（CHV-1）、犬副流感病毒（CPIV）、犬流感病毒（CIV）、犬呼吸道冠状病毒（CRCoV）、犬腺病毒2型（CAV-2）、犬腺病毒1型（CAV-1）以及犬轮状病毒（CRV）。通过分子检测、血清学分析和基因测序技术，全面揭示这些病原的流行病学特征，为制定针对性防控策略提供科学依据。

2 材料与方法

2.1 样本采集

研究历时六年（2018年1月-2024年12月），覆盖中国22个省份。共收集2492份样本，包括2422份出现呼吸道或胃肠道临床症状犬的眼、鼻、肛拭子，以及70份死亡犬的组织样本（肺、气管、肠道）。此外，2020至2024年间在8个省份采集了504份血清样本。所有样本均遵循伦理规范采集，并详细记录临床信息。

2.2 PCR扩增

采用一步法RT-PCR检测CCoV、CDV、CPIV、CIV、CRCoV和CRV；使用Premix Taq进行PCR检测CPV-2、CHV-1和CAV。反应体系为15μL，循环条件包括：45°C 30分钟（RT-PCR），98°C 3分钟，随后30个循环的95°C 30秒、56°C 30秒、72°C 60秒，最终72°C延伸10分钟。每批次实验均设置阴性（H₂O）和阳性对照（细胞培养病毒株或含靶基因质粒）。

2.3 病毒中和与血凝抑制试验

采用病毒中和试验检测CDV、CAV-1、CAV-2和CPIV的中和抗体：将系列稀释的血清与100 TCID₅₀病毒液37°C孵育1小时后接种Vero/MDCK细胞，4-5天后通过Reed-Muench法计算抗体效价。血凝抑制（HI）试验用于检测CPV-2抗体：血清稀释度从1:2至1:4096，加入8个血凝单位的CPV-2病毒，37°C作用30分钟后加入1%猪红细胞，4°C静置90分钟判定结果。保护性抗体滴度阈值设定为：CPV-2 (HI≥1:80)、CDV (中和≥1:32)、CAV-1/CAV-2/CPIV (中和≥1:16)。

2.4 系统发育分析

基于VP2基因对30份CPV-2阳性样本进行分型，使用MEGA 5.1软件采用最大似然法（自举重复1000次）构建进化树。对两例出现严重呼吸道症状的CPIV感染犬的融合（F）基因进行测序，分析其遗传特征。所有序列均提交GenBank数据库。

2.5 数据分析

采用卡方检验比较不同季节、地域、年龄和免疫状态的病毒感染率，p<0.05认为有统计学意义。

3 结果

3.1 十种病毒感染的流行率

总阳性率为49.6%（1236/2492），其中42.2%为单一感染，57.8%存在混合感染（双病毒23.6%，三病毒21.0%，四病毒4.6%，五病毒及以上8.6%）。各省阳性率差异显著（27.8%-83.3%），北京、上海等大城市感染率相对较低。病原特异性检测显示：CPV-2阳性率最高（30.6%），其次为CCoV（14.8%）和CDV（12.4%），CPIV（5.7%）、CHV-1（5.6%）、CIV（4.9%）、CRCoV（3.0%）、CAV-2（2.5%）、CAV-1（2.3%）和CRV（0.7%）依次递减。

3.2 感染的季节性特征

除CAV-1外，其余九种病毒的感染率均呈现显著季节性差异。冬季（12月-次年2月）CCoV（21.6%）、CPIV（13.5%）、CIV（14.0%）、CAV-2（6.1%）和CRV（1.8%）感染率最高；春季（3月-5月）CDV（16.4%）和CHV-1（7.7%）更易流行；CRCoV（4.4%）在秋季（9月-11月）检测率最高；CPV-2则在春（38.8%）、冬（38.6%）两季呈现高峰。

3.3 地理分布差异

南方地区CPV-2阳性率（35.4%）显著高于北方（26.5%），而CCoV、CDV、CHV-1、CIV、CAV-2和CAV-1在北方感染率更高（分别为17.1%、13.7%、8.2%、5.8%、3.5%、3.8%）。CPIV、CRCoV和CRV的南北分布无显著差异。

3.4 年龄相关性

6月龄以下幼犬对CPV-2、CCoV、CDV、CPIV、CHV-1和CRCoV的易感性显著高于其他年龄组。CIV、CAV-2和CAV-1感染与年龄无显著关联，CRV感染仅见于幼犬。

3.5 疫苗接种与感染关联

在详细记录免疫史的546只犬中，未免疫犬的CPV-2（65.9%）和CDV（9.3%）感染率显著高于免疫犬（20.1%、2.2%）。CCoV、CPIV、CAV-2和CAV-1的感染率在免疫与未免疫犬间无统计学差异。

3.6 血清抗体检测

398只免疫犬对CPV-2、CDV、CAV-1、CAV-2和CPIV的保护率分别为76.9%、72.1%、84.4%、85.7%和49.0%。15只未免疫犬的相应血清阳性率为93.3%、86.7%、33.3%、33.3%和53.3%，提示自然感染可诱导免疫应答。

3.7 CPV-2与CPIV基因特征分析

VP2基因分型显示：CPV-2c为优势基因型（80%，24/30），新CPV-2a型占6.7%（2/30），另检出2例猫泛白细胞减少症病毒（FPV）和2例疫苗株（CPV-2型）。CPIV的F基因进化分析表明，中国流行株与泰国、韩国分离株聚集成独立进化支，与美国、英国疫苗株存在遗传差异（F蛋白V104A、R237E、V290A、R299Q、I428V位点氨基酸替换）。

4 讨论

本研究揭示中国犬群病毒性传染病三个突出特征：一是混合感染普遍（34.1%存在三种以上病原共感染），可能加剧疾病严重程度；二是流行病学参数呈现明显时空异质性，CPV-2南方高发、呼吸道病毒冬季活跃、幼犬易感等规律与气候因素和免疫发育特点密切关联；三是疫苗保护效果存在病原特异性，对CPV-2/CDV保护良好，但对CPIV保护率不足（49.0%）且与流行株遗传进化不匹配。CPV-2c基因型替代趋势（当前占80%）和FPV跨种传播迹象提示病毒进化动态需持续监测。研究局限性包括部分犬只免疫记录缺失（78.1%）、年龄数据不完整（54%）以及对非疫苗覆盖病原（如CHV-1、CIV）的免疫效应未作评估。

5 结论

2018-2024年中国犬病毒性传染病流行态势复杂，CPV-2、CCoV和CDV是优势病原，其传播受季节、地域和宿主年龄因素显著调控。现有疫苗对部分病原保护效果有限，流行毒株的遗传变异（特别是CPV-2c和CPIV亚洲谱系）凸显了疫苗株更新的迫切性。建议加强分子流行病学监测、优化免疫程序并研发针对流行株的新型疫苗，以有效控制犬病毒性传染病的传播。