PTIP通过调控氧化应激与炎症反应抑制高糖环境下视网膜微血管内皮细胞异常增殖、迁移及血管生成的作用机制

《In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal》：PTIP inhibits proliferation, migration, and angiogenesis of retinal microvascular endothelial cells in a high-glucose environment

本文揭示了PAX互作蛋白1（PTIP）在高糖诱导的视网膜微血管内皮细胞（RMECs）功能障碍中的保护作用。研究发现PTIP过表达可显著抑制RMECs的增殖（CCK-8法）、迁移（划痕实验）和成管能力（基质胶实验），并降低氧化应激（MDA/SOD）和炎症因子（TNF-α/IL-6）水平，其机制与调控血管生成相关因子（VEGF、MMP3、MMP9、EGR3）表达密切相关。该研究为糖尿病视网膜病变（DR）的靶向治疗提供了新思路。

　　

PTIP在高糖环境下的表达变化

研究首先通过免疫荧光和流式细胞术鉴定RMECs标志物CD31，确认细胞纯度。采用40 mM葡萄糖处理48小时成功构建体外DR模型，CCK-8检测显示高糖显著促进RMECs增殖活性。与正常葡萄糖组相比，高糖环境下PTIP和超氧化物歧化酶（SOD）表达下调，而血管内皮生长因子（VEGF）和丙二醛（MDA）水平显著上升，提示PTIP可能参与DR病理调控。

PTIP过表达对细胞功能的调控作用

通过构建PTIP过表达载体（OE-PTIP）转染RMECs，qRT-PCR和蛋白质印迹（WB）验证转染效率。功能实验表明：PTIP过表达显著抑制高糖诱导的RMECs增殖活性（CCK-8法）和迁移能力（划痕实验），并降低成管实验中节点数量（Nb junctions）和总长度（Tot. length）。同时，OE-PTIP组SOD活性升高，MDA、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）含量下降，提示PTIP可缓解氧化应激和炎症反应。

PTIP对血管生成相关分子的影响

WB和免疫荧光检测显示，PTIP过表达显著下调血管生成关键蛋白VEGF、基质金属蛋白酶3（MMP3）、MMP9和早期生长反应因子3（EGR3）的表达。相反，通过小干扰RNA（si-PTIP-1）敲低PTIP后，RMECs的增殖、迁移和成管能力增强，上述分子表达上调，氧化应激和炎症指标恶化。

PTIP干扰实验的验证效应

选择干扰效率最佳的si-PTIP-1进行后续实验。PTIP敲除在高糖环境下进一步加剧RMECs的病理行为：CCK-8显示细胞增殖活性提升，划痕愈合率增加，成管能力增强。同时，SOD活性下降，MDA、TNF-α和IL-6水平上升，VEGF、MMP3、MMP9和EGR3蛋白表达显著升高，证实PTIP缺失会加速DR相关细胞损伤。

讨论与机制展望

本研究首次阐明PTIP通过调控VEGF/MMPs/EGR3通路抑制高糖诱导的RMECs异常行为。PTIP作为染色质调节因子，可能通过表观遗传机制影响下游靶基因转录。未来需通过动物实验验证PTIP在体作用，并深入探索其调控的具体信号通路（如EphA2或PRDM1相关通路），为DR治疗提供新靶点。