中国鸡群H3N8禽流感病毒的毒力与传播特性研究

《Virulence》：Virulence and transmission characteristic of H3N8 avian influenza virus circulating in chickens in China

本研究系统揭示了中国鸡源H3N8禽流感病毒（AIV）的进化特征、双受体结合特性、哺乳动物细胞适应性及高效传播能力。通过多学科方法证实病毒内部基因源自H9N2，HA/PB2基因与新型H3N3高度同源，保留禽源受体结合基序（HA-Q226/G228）的同时具备α2,3/α2,6-双唾液酸结合能力。特别发现AH12毒株可实现鸡群100%空气传播，其在小鼠模型中表现多器官嗜性，而JS13株神经氨酸酶（NA）活性显著增强（p<0.05）。研究强调了该病毒在禽-人界面的溢出风险，为跨物种传播预警和疫苗研发提供关键依据。

　　

隔离与鉴定H3N8病毒

研究团队从中国东部三省的无症状鸡群中分离出三株H3N8禽流感病毒（AH12、JS13、ZJ07），其病毒滴度达9.25-9.5 Log₁₀EID₅₀/mL，血凝（HA）效价为512-2048 HAU/25μL。血凝抑制（HI）试验显示毒株仅与H3亚型抗血清反应，证实其抗原特异性。

遗传与进化特征分析

全基因组测序显示病毒HA/NA基因与人类H3N8毒株（如A/Henan/4-14CNIC/2022）核苷酸同源性>97.4%，内部基因（PB2、PB1、PA、NP、M、NS）源自H9N2病毒。值得注意的是，HA和PB2基因与新型三重重组H3N3病毒（源于H3N8/H9N2/H10N3）同源性达96.8-99.1%，揭示禽类宿主中持续的跨亚型重组现象。

受体结合特性

固相结合实验证实所有毒株均具备双受体结合能力，可同时结合禽源（α2,3-唾液酸）和人源（α2,6-唾液酸）受体。其HA受体结合域（RBD）关键位点（222W、226Q、227S、228G）与人类H3N8毒株完全保守，提示潜在跨物种传播基础。

分子特征解析

病毒HA蛋白裂解位点为低致病性特征（PEKQTR↓GLF）。尽管保留禽型受体结合基序（Q226/G228），但检测到多个哺乳动物适应相关突变：PB2-588V、PB1-473V、PA-409N等。所有毒株均携带M2离子通道S31N突变（金刚烷胺耐药标志），且HA蛋白存在8个潜在糖基化位点（H3编号22、38、53等）。

热稳定性与神经氨酸酶活性

56℃热处理实验显示ZJ07毒株HA活性可维持180分钟，而JS13在90分钟完全失活。神经氨酸酶活性检测中，JS13在1:128稀释度下仍保持显著高于对照的荧光强度（p<0.0001），提示其酶活性稳定性增强。

细胞复制动力学

在禽源（DF-1）、犬源（MDCK）和人源（A549）细胞中，所有毒株均能在48小时达到复制峰值（4.65-7.5 Log₁₀TCID₅₀/mL）。其中MDCK细胞支持最高病毒产量，ZJ07复制能力显著低于JS13/AH12（差值0.47-2.2 Log₁₀TCID₅₀/mL），体现宿主细胞嗜性差异。

小鼠致病性评估

BALB/c小鼠感染后均存活，但出现4.4-10%的体重下降。AH12毒株独特性地在肺和脑组织中复制，JS13可在鼻腔持续存在至5天（dpi），而ZJ07在5 dpi被完全清除。组织病理学仅见轻度血管周淋巴细胞浸润。

鸡体致病性与传播

SPF鸡感染后无临床症状，但病毒在喉头、盲肠广泛分布，JS13更可扩散至心、脾等器官。接触传播实验中所有毒株均有效传播，但仅AH12实现100%空气传播。感染鸡只排毒时间达6-10天，21 dpi血清学检测证实接触组全部血清阳转。

讨论与展望

研究证实鸡源H3N8病毒通过H9N2内部基因重组获得跨物种潜力，其双受体结合、哺乳细胞适应及AH12空气传播能力构成重大生物安全风险。建议加强禽-人界面监测，并研发针对界面毒株的广谱疫苗。未来需通过反向遗传学进一步阐明JS13的NA稳定性机制及AH12空气传播的分子基础。