贝加尔湖宏基因组中的环状反向重复编码单链(CRESS)DNA病毒

《Journal of Great Lakes Research》:Circular Rep-encoding single-stranded (CRESS) DNA viruses in metagenomes of Lake Baikal

【字体: 时间:2026年01月12日 来源:Journal of Great Lakes Research 2.5

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  贝加尔湖浮游微生物中首次发现47个CRESS病毒基因组,其中12个为完整序列。系统发育分析显示其Rep蛋白形成独立簇群,与已命名病毒家族差异显著,提示新病毒类群的存在。基因组结构以Type II和V为主,含保守非九聚体ori和典型Rep蛋白结构域,且病毒在湖体不同季节、年份及深度中稳定存在,凸显古老湖泊作为独特病毒库的价值。

  
Sergey A. Potapov | Anna S. Gladkikh | Ekaterina O. Klyuchnikova | Irina V. Tikhonova | Olga I. Belykh
俄罗斯科学院西伯利亚分院湖沼学研究所,乌兰巴托尔斯卡亚街3号,伊尔库茨克664033,俄罗斯

摘要

贝加尔湖是地球上最古老的湖泊之一,也是世界上最深的淡水湖,其独特的病毒群落是由其古老的、贫营养的、高氧含量的生态系统塑造的。本研究首次对贝加尔湖浮游生物(<0.2 μm)中的环状复制编码单链(CRESS)DNA病毒进行了全面分析。宏基因组测序鉴定出了47个类似CRESS的基因组(1003–5249个核苷酸),其中包括12个潜在的完整基因组,这些基因组编码复制(Rep)和衣壳蛋白,与RefSeq数据库中的已知序列的相似度有限(最大同一性:77.2%)。系统发育分析显示,贝加尔湖的Rep蛋白与未分类的CRESS群体(CRESS1、CRESS2、CRESS3、CRESS5)以及Nanoviridae/Alphasatellitidae聚类在一起,与Circoviridae和CRESS4形成相邻的簇,并形成了与已知病毒科不同的“贝加尔”簇。这些簇表明这些病毒经历了长期的独立进化,可能与当地的宿主或全球CRESS病毒采样中的空白有关。基因组组织主要遵循II型和V型(双义/单义)结构,具有保守的非九核苷酸基序(例如TAGTATTAC)和典型的CRESS病毒Rep结构域。值得注意的是,在数据库中没有找到完全相同的匹配序列,这强调了贝加尔湖病毒群的独特性。某些病毒基因组在多年、不同季节和深度中的存在表明它们在贝加尔湖中具有广泛的生态分布。我们的发现扩展了已知的CRESS DNA病毒多样性,并强调了古老湖泊作为未被描述病毒谱系库的作用。

引言

贝加尔湖是世界上最深的湖泊之一,也是最古老的湖泊(约2500万年的历史),由贝加尔裂谷带的构造活动形成。该湖长度达636公里,宽度从塞伦加河三角洲附近的25公里到巴尔古津河口的80公里不等。位于中亚,海拔455.6米,表面积为31,500平方公里,海岸线长约2000公里。湖中央的深度达到1637米,而南部和北部盆地的深度分别为1432米和889米(Galaziy, 1993)。作为最大的淡水储库,贝加尔湖含有地球上20%的地表淡水,体积为23,000立方公里。其深层水体全年温度稳定在约4°C。该湖还以其高氧饱和度(>80%)、低营养水平和极低的有机碳含量而闻名(Khodzher等人,2018)。这些独特的地质和水文特征促进了其极高的生物多样性和特有性(Kozhova和Izmest’eva,1998)。
病毒是专性细胞内寄生虫,可能感染所有类型的细胞生命(Simmonds等人,2017)。与传统方法不同,宏基因组学可以识别在实验室条件下难以或无法获得的病毒。此前,宏基因组学已经在各种水生环境中鉴定出许多双链DNA(dsDNA)病毒(Gregory等人,2019;Palermo等人,2019;Watkins等人,2015),但在某些情况下,分析显示单链DNA(ssDNA)病毒占主导地位(Aguirre de Cárcer等人,2015;Zeigler Allen等人,2017)。
Circoviridae成员感染动物;Bacilladnaviridae感染硅藻;Genomoviridae感染真菌;Nanoviridae和Geminiviridae感染植物。Smacoviridae成员以及最近描述的Redondoviridae家族成员是通过宏基因组学发现的,据推测也感染动物,尽管有人提出Smacoviridae可能与产甲烷的古菌有关(Krupovic等人,2020)。
大多数ssDNA病毒拥有一个小的环状基因组,通过滚环机制进行复制(Zhao等人,2019),而细小病毒和双链病毒则具有线性的单链DNA基因组(Cotmore和Tattersall,2014;Krupovic和Koonin,2014)。Zhao等人(2019)将编码复制起始蛋白(Rep)的环状单链DNA病毒称为环状复制编码单链(CRESS)DNA病毒。
所有真核CRESS-DNA病毒都编码超家族3解旋酶(S3H),这些解旋酶通常与HUH内切酶融合形成双域Rep蛋白。相比之下,原核ssDNA病毒编码单一的HUH内切酶。此外,ssDNA病毒Rep蛋白的N端内切酶结构域包含称为滚环复制(RCR)基序I、II和III的保守基序(Rosario等人,2012)。此外,在超家族3的C端解旋酶结构域中,所有感染真核生物的环状ssDNA病毒的主要家族的Rep蛋白都表现出四个保守的基序:Walker A、B和C(Rosario等人,2012)以及一个“精氨酸指”基序(Kazlauskas等人,2017)。大多数CRESS DNA基因组的另一个特征是保守的复制起始位点(ori),该位点由预测的茎环结构顶部的非九核苷酸基序标记,滚环复制在此处开始(Rosario等人,2012)。
先前的研究揭示了多种CRESS病毒的多样性,其中大多数尚未培养和分类(Kazlauskas等人,2018)。与衣壳蛋白不同,Rep蛋白在不同CRESS DNA病毒群体之间表现出显著的相似性,并具有保守的结构域组织,包括N端核酸酶和C端解旋酶结构域。因此,Rep蛋白被提议作为CRESS DNA病毒的大分类标记(Koonin等人,2020)。在未分类的CRESS病毒中,71%具有嵌合Rep蛋白。这种嵌合性表明未分类的CRESS病毒构成了一个动态的群体。去除嵌合序列后,发现了六个单系Rep群体(Kazlauskas等人,2018)。CRESS-DNA病毒的Rep蛋白与小型细菌滚环复制质粒的同源Rep蛋白最为接近,这些质粒也编码HUH和S3H(Kazlauskas等人,2019)。
根据Rosario等人(2012)的研究,CRESS病毒的基因组分为八种类型。I型基因组的开放阅读框(ORFs)方向相反,并在主要ORFs的5′端具有潜在的茎环结构。II型基因组的ORFs具有环状病毒的特征,即双义组织和5′端的茎环结构。然而,在II型基因组的Rep编码链中未检测到保守的非九核苷酸序列。
III型和IV型基因组具有双义组织,但包含茎环结构的基因间区域位于主要ORFs的3′端。V型和VI型基因组的主要ORFs方向相同。VII型和VIII型基因组仅编码一个主要ORF,这些基因组可能代表多组分病毒或亚病毒元件。
先前的研究在贝加尔湖的浮游生物宏基因组(Butina等人,2021)、水转录组(Potapov等人,2023)以及本地淡水腹足类Benedictia baicalensis的转录组(Butina等人,2023)中检测到了类似CRESS DNA病毒的序列。然而,这些序列尚未进行详细分析。尽管宏基因组学研究揭示了水生环境中双链DNA病毒的高度多样性,但据我们所知,CRESS DNA病毒在淡水生态系统中的研究仍然不足,尤其是在古老的湖泊中。
本研究的目的是从贝加尔湖<0.2 μm浮游生物样本中鉴定和表征CRESS DNA病毒序列。研究计划评估这些病毒在贝加尔湖水域的空间分布,确定它们在冰下季节(0–50米)上层水域的垂直分布,并分析它们出现的季节性和年际动态,以识别其分布的生态模式。

样本收集

样本从贝加尔湖的三个盆地(南部、中部和北部)以及马拉约莫雷海峡的一个中心站点收集(图1)。水样依次通过0.4 μm和0.2 μm孔径的过滤器(Sartorius,德国)过滤,以去除碎屑、动物浮游生物、植物浮游生物和细菌浮游生物。然后使用VivaFlow 200(Sartorius,德国)在切向流条件下进行超滤,截留分子量为50 kDa。

新型CRESS DNA病毒基因组的表征

我们共恢复了47个潜在的CRESS DNA病毒基因组。序列长度范围从1003到5249个核苷酸。在47个序列中,有12个缺乏可识别的衣壳蛋白,要么是因为contig只包含一个ORF,要么是因为与数据库中已知序列的相似度较低。根据CheckV分析,12个序列被归类为“完整”基因组(LBaCV-8、?9、?24、?25、?26、?27、?28、?29、?31、?32、?33和?44)。

讨论

在这项研究中,我们首次对贝加尔湖CRESS DNA病毒的基因组和Rep蛋白进行了结构分析。由于数据库中缺乏同源物,很难确定这些序列是否属于任何已知的CRESS DNA病毒物种;它们可能代表新的病毒。例如,根据ICTV建立的分类标准,同一属内的Circoviridae成员应具有超过80%的平均核苷酸相似性

结论

在这项研究中,我们首次对不同季节和年份从贝加尔湖和马拉约莫雷海峡水中分离出的CRESS DNA病毒序列进行了结构分析。我们成功重建了47个序列,其中12个可能代表完整的基因组。由于在所有样本中都检测到了CRESS DNA病毒,无论在哪个季节或年份,这证实了它们的生态重要性。

CRediT作者贡献声明

Sergey A. Potapov:撰写 – 审稿与编辑,撰写 – 原始草稿,可视化,验证,软件,方法学,调查,形式分析,数据管理,概念化。Anna S. Gladkikh:撰写 – 审稿与编辑,监督,软件,资源,方法学,资金获取,数据管理。Ekaterina O. Klyuchnikova:撰写 – 审稿与编辑,验证,软件,方法学,调查,数据管理。Irina V. Tikhonova:撰写 – 审稿与编辑,验证

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

野外工作是在G. Titov研究船上进行的(“贝加尔湖LIN SB RAS研究船队中心”)。这项工作得到了国家政府的支持,并在州项目No. 1023032700318-2-1.6.2“贝加尔湖病毒和细菌群落的综合研究:结构-功能和遗传组织、动态以及在各种影响下的微生物群落变化”框架内完成
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