《Aging Cell》：Hevin Promotes Aging-Related Cardiac Dysfunction via Facilitating Cardiac Inflammation in Male Mice
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本研究首次揭示脂肪因子Hevin在心脏衰老中的关键作用。研究发现，衰老小鼠血清及脂肪组织（尤其是iWAT）中Hevin表达显著升高，并通过Toll样受体4（TLR4）激活心脏巨噬细胞，诱导其向促炎M1表型极化及C-C基序趋化因子配体5（CCL5）分泌，进而招募炎症细胞、放大炎症反应，最终导致年龄相关性心功能不全。敲低Hevin或阻断CCL5可有效缓解衰老相关心脏炎症与功能障碍，提示Hevin/CCL5轴是心脏衰老的潜在干预靶点。
引言
衰老是心血管疾病的重要独立危险因素，年龄相关的心脏功能障碍显著影响老年人死亡率和发病率。慢性低度炎症（炎症衰老）是衰老的核心特征之一，其中巨噬细胞作为关键免疫细胞，其极化状态在炎症调控中起核心作用。Hevin（SPARCL1）是一种富含半胱氨酸的分泌型基质细胞蛋白，既往研究提示其参与炎症调控，但其在心脏衰老中的作用尚未明确。
Hevin在衰老小鼠循环系统中升高且与心功能相关
通过人类血浆蛋白质组数据库分析发现，70岁以上人群循环Hevin水平显著升高。在衰老（20月龄）雄性C57BL/6小鼠中，血清Hevin水平较年轻（8月龄）小鼠明显上升，且与心衰标志物N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平正相关，与射血分数（FS）负相关。临床样本分析进一步证实老年（>60岁）人群血清Hevin升高，并与NT-proBNP升高及射血分数下降相关。组织来源分析表明，衰老小鼠心脏组织Hevin表达无显著变化，但脂肪组织（特别是腹股沟白色脂肪组织，iWAT）中Hevin表达显著上调。脂肪移植实验证实，衰老小鼠iWAT移植可导致受体小鼠血清Hevin升高，而3T3-L1细胞成脂分化过程中Hevin表达随过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）同步上调，提示衰老脂肪组织是循环Hevin的主要来源。
Hevin暴露促进衰老相关心脏炎症和功能障碍
衰老小鼠腹腔注射重组Hevin蛋白（0.2 mg/kg）可进一步加剧心脏衰老表型：衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）阳性细胞增多、端粒长度缩短、脂褐素积累增加，以及p16、p19、p21等衰老标志物表达上调。同时，Hevin处理增强心脏炎症反应，包括白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-18等促炎因子水平升高，巨噬细胞（CD68+/F4/80+）浸润增加。超声心动图显示Hevin注射加重衰老小鼠心脏收缩功能（左心室舒张末期内径LVIDd、收缩末期内径LVIDs增加，FS下降）与舒张功能（E/A比值降低）障碍，并促进心肌细胞肥大（心肌细胞横截面积增大、心脏重量/胫骨长度比值HW/TL升高）及间质纤维化（胶原沉积增加、胶原蛋白Iα1（Col1α1）、IIIα1（Col3α1）mRNA上调）。急性Hevin注射实验亦验证其可快速恶化衰老心脏功能与结构。
Hevin敲低缓解衰老相关心脏炎症和功能障碍
通过腺相关病毒血清型9（AAV9）载体递送短发夹RNA（shRNA）敲低小鼠全身Hevin表达，可显著改善衰老心脏表型：SA-β-gal+细胞减少、端粒长度延长、脂褐素积累下降，炎症因子水平及巨噬细胞浸润减轻。心功能检测显示敲低Hevin后衰老小鼠FS提升、LVIDd与LVIDs减小、E/A比值改善，心肌肥大与纤维化亦明显缓解。使用另一条shHevin#序列验证结果一致，表明Hevin缺失对衰老心脏具有保护作用。
Hevin通过诱导CCL5加剧年龄相关心脏炎症和功能障碍
RNA测序（RNA-seq）分析显示，Hevin处理激活衰老心脏中肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路及Toll样受体（TLR）信号通路。差异表达基因中CCL5表达显著上调，并经实时定量PCR（qRT-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及免疫组化验证。相关性分析显示血清Hevin与心脏CCL5水平正相关，且心脏CCL5与NT-proBNP正相关、与FS负相关。功能上，采用抗CCL5中和抗体（Anti-CCL5 mAb）或CCR5抑制剂UK-427857阻断CCL5活性，可逆转Hevin诱导的心脏衰老表型：衰老细胞减少、炎症因子（CXCL1、CXCL2、CCL2、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α）水平下降，心功能及心脏结构改善。
CCL5促进衰老心脏中巨噬细胞极化
体外实验表明，Hevin刺激巨噬细胞系RAW264.7可上调CCL5及基质金属蛋白酶9（MMP9）表达，促进促炎因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）分泌，并诱导巨噬细胞向M1表型（CD86+/CD206?）极化。RAW264.7条件培养基（ConM）可诱导新生大鼠心肌细胞（NRCM）衰老（SA-β-gal+细胞增多，p16、p19、p21表达上调），而Hevin直接处理NRCM无此效应，提示Hevin通过巨噬细胞间接促心肌细胞衰老。共培养实验进一步证实Hevin刺激的巨噬细胞可促进NRCM衰老。人体外周血单核细胞实验验证Hevin可诱导CCL5/MMP9表达及促炎因子释放。体内抗CCL5抗体处理可减少Hevin诱导的心脏巨噬细胞浸润及CCL5+巨噬细胞积累。
Hevin通过TLR4/p65通路调控CCL5表达
机制探讨发现，TLR4特异性抑制剂TAK-242可阻断Hevin对RAW264.7细胞CCL5、MMP9及促炎因子表达的诱导作用，并抑制核因子κB（NF-κB）p65磷酸化（P-p65）。TAK-242处理后的ConM不再诱导NRCM衰老。体内实验显示，TAK-242可逆转Hevin对衰老心脏p65活化、CCL5表达、炎症反应、心功能及结构的不良影响。此外，手术切除衰老小鼠iWAT可降低血清Hevin及心脏CCL5水平，缓解心脏炎症与功能障碍，提示靶向脂肪组织Hevin分泌具有治疗潜力。
讨论
本研究阐明脂肪因子Hevin在心脏衰老中通过TLR4/NF-κB/CCL5轴放大炎症反应、驱动心功能衰退的新机制。Hevin并非直接损伤心肌，而是在衰老微环境中加剧巨噬细胞介导的炎症应答，导致心肌细胞衰老及纤维化。研究还提示Hevin可能参与衰老相关的肾功能障碍，且其表达存在性别差异。靶向iWAT-Hevin-巨噬细胞-CCL5轴可能为心脏衰老提供新的干预策略。
