2022至2024年间在越南罗非鱼养殖场分离出的无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的血清型、毒力基因及抗菌素耐药性的分布情况

《Aquaculture》：Distribution of serotypes, virulence genes, and antimicrobial resistance of Streptococcus agalactiae isolated in tilapia farms in Vietnam over 2022–2024

越南六省鲈鱼养殖场2022-2024年S. agalactiae疫情研究发现主要血清型为Ia（74.2%）和III（25.8%），携带15种毒力基因组合，其中III型独有fbsA/hylB/cfb基因簇，Ia型携带bac基因。所有菌株呈现多药耐药特征，耐甲氧西林青霉素酶（MRSP）阳性率达16.5%，耐喹诺酮类抗生素比例达81.6%。

　　

多安·蒂·尼欣（Doan Thi Nhinh）|丹·蒂·霍阿（Dang Thi Hoa）|陈·蒂·亭（Tran Thi Trinh）|梁·蒂·森（Luong Thi Sen）|阮·范·端（Nguyen Van Tuyen）|阮·蒂·黄·江（Nguyen Thi Huong Giang）|金·范·范（Kim Van Van）|阮·蒂·兰（Nguyen Thi Lan）|张·丁·怀（Truong Dinh Hoai）

越南国立农业大学渔业学院，河内131004，越南

摘要

无乳链球菌（Streptococcus agalactiae是一种重要的细菌病原体，与养殖罗非鱼的链球菌病有关，常导致高死亡率并造成巨大的经济损失。据我们所知，本研究首次全面调查了与越南罗非鱼养殖场疾病爆发相关的S. agalactiae分离株的血清型分布、毒力基因谱型和抗菌素耐药性模式。2022年至2024年间，从六个省份的102个养殖场的276起疾病爆发中采集了表现出典型链球菌病症状的鱼样本，这些养殖场包括池塘养殖和网箱养殖系统。通过形态学和生化特征以及PCR检测，共确认276株为S. agalactiae。多重PCR血清分型显示两种主要血清型：Ia（74.2%）和III（25.8%），在不同地区或采样年份之间其分布没有显著差异。对14个靶标的毒力基因分析发现了15种不同的基因型，其中6种与血清型III相关，9种与血清型Ia相关。所有分离株均携带fbsA, hylB基因，而cfb; lmb和sbp1-F基因仅存在于血清型III中，bac基因仅存在于血清型Ia中。值得注意的是，本研究详细分析了血清型特异性的抗菌素耐药性，分别发现了血清型III和Ia分离株中的6种和16种不同的耐药表型，并且普遍存在多重耐药性，尤其是对萘啶酸、新霉素、氧四环素和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂的耐药性。尽管大多数分离株对阿莫西林和头孢菌素等关键抗生素仍敏感，但观察到的耐药模式和表型多样性强调了有针对性的抗菌素管理的重要性。总体而言，这些发现为越南罗非鱼养殖的流行病学研究提供了重要基础，并为疫苗开发和可持续疾病管理策略提供了支持。

引言

罗非鱼（Oreochromis属）是全球养殖最广泛的鱼类之一，因其生长速度快、饲料转化效率高以及对多种环境条件的耐受性强（Prabu等人，2019年；Samaddar，2022年）。在越南，罗非鱼养殖在过去十年中迅速发展，对国内粮食安全和出口收入做出了重要贡献。2024年，罗非鱼出口额约为4100万美元，比2023年增长了138%（VASEP，2025年）。这一增长主要得益于河流和水库中的池塘养殖和网箱养殖系统的集约化（MARD，2019年）。然而，这种集约化也导致了细菌性疾病发病率的增加，对罗非鱼养殖的生产效率和可持续性构成了严重挑战（Walker，2004年；Cain，2022年）。

在细菌病原体中，无乳链球菌是导致链球菌病的主要病原体，被认为是全球罗非鱼养殖中最具经济破坏性的疾病之一（Amal和Zamri-Saad，2011年；Zhang，2021年）。该疾病通常表现为眼球突出、游泳行为异常和内部出血等症状，爆发往往发生在水温升高促进细菌繁殖的时期（Evans等人，2002年；Legario等人，2020年）。S. agalactiae表现出显著的遗传和血清学异质性，根据荚膜多糖的变化至少分为十个血清型（Ia、Ib、II–IX）（Shabayek和Spellerberg，2018年；Lo等人，2019年）。其中，血清型Ia、Ib和III最常与罗非鱼的链球菌病相关，其流行率和毒力存在地区差异（Li等人，2013年；Areechon等人，2016年）。毒力由多个基因介导，这些基因参与黏附、侵袭和免疫逃逸，其分布因血清型和地理区域而异（Glaser等人，2002年；Bobadilla等人，2021年）。全面了解这些毒力决定因子的多样性和分布对于阐明疾病爆发动态和指导疫苗开发工作至关重要。

此外，抗菌素耐药性（AMR）已成为水产养殖中的一个主要问题，这主要是由于抗生素的广泛使用且往往缺乏监管（Cabello，2006年；Chen等人，2020年）。包括S. agalactiae、Aeromonas hydrophila和Edwardsiella ictaluri在内的多重耐药细菌在罗非鱼和其他养殖鱼类中的报道越来越多（Dangwetngam等人，2016年；Nhinh等人，2022年）。耐药性的增加不仅降低了治疗效果，还促进了耐药基因在水生环境中的传播，从而对生态系统健康和公共安全构成威胁（Heuer等人，2009年；Marti等人，2014年）。因此，持续监测抗菌素耐药性模式对于指导合理使用抗生素和制定可持续的疾病管理策略至关重要。

尽管越南罗非鱼养殖发展迅速，但关于S. agalactiae的血清型分布、毒力基因谱型和抗生素耐药性的信息仍然有限。本研究旨在首次全面分析2022年至2024年间越南六个主要罗非鱼生产省份中与链球菌病爆发相关的S. agalactiae分离株。

样本收集

样本收集

在2022年至2024年的三年期间，从越南北部六个省份（富寿省、北宁省、海防省、 Hung Yen省、河内省和宁平省）的102个罗非鱼养殖场的276起疾病爆发中收集了表现出链球菌病症状的鱼（图1）。采样地点包括57个池塘养殖场和45个位于河流和水库中的网箱养殖场。疾病监测采用被动方式，即养殖场在发现疾病时通知研究团队

疾病爆发详情

2022年至2024年间，六个省份共记录并采集了276起罗非鱼链球菌病爆发样本，估计死亡率为30%至70%。这些爆发发生在尼罗罗非鱼和红罗非鱼中，水温范围在28.5°C至36.5°C之间（表2）。值得注意的是，79.7%的爆发发生在水温超过30°C的情况下，其余20.3%发生在水温在28.5°C至30°C之间。

讨论

无乳链球菌是全球养殖罗非鱼链球菌病爆发的主要细菌病原体，常在中国、泰国、埃及和巴西等关键水产养殖区导致高死亡率 and 重大经济损失（Mian等人，2009年；Liu等人，2016年；Shoemaker等人，2017年；Zhang，2021年）。这种病原体的全球影响日益增加，部分原因在于不同地区的血清型分布和毒力基因谱型的差异（Syuhada等人

CRediT作者贡献声明

多安·蒂·尼欣（Doan Thi Nhinh）：撰写 – 审稿与编辑，撰写 – 原稿，数据可视化，方法学，正式分析，数据管理。丹·蒂·霍阿（Dang Thi Hoa）：数据可视化，方法学，正式分析，数据管理。陈·蒂·亭（Tran Thi Trinh）：数据可视化，方法学，正式分析，数据管理。梁·蒂·森（Luong Thi Sen）：数据可视化，方法学，正式分析，数据管理。阮·范·端（Nguyen Van Tuyen）：数据可视化，方法学，正式分析，数据管理。阮·蒂·黄·江（Nguyen Thi Huong Giang）：数据可视化，方法学

伦理声明

作者确认所有涉及动物的程序均符合伦理政策。对患病鱼的解剖获得了越南国立农业大学渔业学院动物护理和使用委员会（FFVNUA-ACUC）的伦理批准，批准编号：160122-8-KHCN-FFVNUA。

未引用参考文献

Delannoy等人，2013年

Ferrari等人，2024年

Leal等人，2019年

Lukkana等人，2016年

Rosini等人，2006年

Sukenda等人，2021年

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

致谢

本工作得到了越南国立农业大学（VNUA）的资助，资助编号为T2024-13-16T?。