《Frontiers in Immunology》：Anti-colorectal cancer effects of IRX4 and sensitivity studies to oxaliplatin
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本综述系统阐述了转录因子IRX4在结直肠癌（CRC）中的肿瘤抑制功能及其调控奥沙利铂（OXA）化疗敏感性的新机制。研究通过甲基化芯片筛选发现IRX4启动子区高甲基化导致其表达下调，实验证实IRX4过表达可显著抑制CRC细胞增殖/迁移/侵袭并促进凋亡。机制上，IRX4通过阻断NF-κB信号通路核转位并抑制EGFR磷酸化，逆转OXA耐药。该研究为CRC预后判断和联合化疗策略提供了新靶点。
IRX4作为甲基化差异核心基因的发现
通过Illumina Infinium 935K甲基化芯片分析结直肠癌（CRC）组织与正常组织的差异，结合TCGA和GTEx数据库的RNA-seq数据，筛选出267个差异甲基化与差异表达重叠基因。其中IRX4启动子区cg07882671、cg24876960等位点呈现显著高甲基化状态（P< 0.001），且其mRNA和蛋白表达在CRC组织及细胞系（HCT116、SW480等）中均显著下调（P= 0.0016）。
IRX4表达与临床预后的关联
对80例CRC临床样本分析显示，IRX4低表达与肿瘤浸润深度（T分期）显著负相关（P= 0.025）。生存分析证实IRX4低表达患者无复发生存期更短（GSE37892数据集，P< 0.05）。二进制逻辑回归进一步验证IRX4是肿瘤浸润深度的独立影响因子（P= 0.028）。
IRX4过表达对CRC细胞生物学行为的影响
通过pcDNA3.1(+)-IRX4质粒转染HCT116和SW480细胞，实验组较空载体对照组显示：
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增殖能力：CCK-8和EdU实验表明IRX4过表达显著抑制细胞活力（OD值下降，P< 0.001）和DNA合成（EdU阳性率降低，P= 0.003）
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迁移/侵袭：划痕实验显示迁移面积减少（P< 0.001），Transwell实验显示穿膜细胞数下降（P= 0.004）
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凋亡诱导：流式细胞术检测凋亡率显著升高（Annexin V+细胞比例增加，P< 0.001）
IRX4增强奥沙利铂化疗敏感性的机制
- 1.
OXA疗效关联性：GEO数据集分析显示OXA无应答组（NR）IRX4表达显著低于应答组（R）（P< 0.05）
- 2.
EGFR通路调控：Western blot检测发现IRX4过表达联合OXA处理可降低p-EGFR（Tyr1197）、p-AKT（Ser473）和p-ERK（Thr202/Tyr204）磷酸化水平。使用EGFR激动剂NSC228155可部分逆转该效应
- 3.
NF-κB通路抑制：荧光素酶报告基因实验显示IRX4抑制TNF-α诱导的NF-κB转录活性（P= 0.0001），免疫荧光证实IRX4过表达阻碍p65核转位
信号通路富集分析
GSEA分析提示IRX4低表达与NF-κB、JAK-STAT3通路激活相关，KEGG富集显示DNA复制、TCA循环等代谢通路可能参与IRX4的抑癌作用。
讨论与展望
本研究首次揭示IRX4通过表观遗传沉默促进CRC进展，其过表达可协同OXA抑制EGFR/NF-κB轴进而逆转化疗耐药。未来需在动物模型中验证IRX4与exosome介导的肿瘤微环境交互作用，并探索其作为联合治疗靶点的临床转化潜力。
