基于nfo RPA-LFD的多重可视化方法同时检测五种牛病毒性病原体的研究

《BMC Veterinary Research》：Establishment and application of a visual Nfo-based recombinase polymerase amplification-lateral flow device assay for rapid detection of five bovine viruses (BVDV, AKAV, BNoV, BEV, and BCoV)

　　

摘要

背景

牛养殖产业因感染牛病毒性腹泻（BVD）、赤羽病（AKA）、牛诺如病毒（BNoV）、牛肠病毒（BEV）和牛冠状病毒（BCoV）等多种传染病而遭受了严重的经济损失。这些病原体往往引起相似的临床表现，包括腹泻、呕吐以及怀孕牛的繁殖障碍，且常以亚临床或混合感染的形式发生，从而增加了诊断难度。因此，建立一种快速、灵敏且可在现场部署的诊断方法对于有效的疾病监测和控制至关重要。nfo RPA检测试剂盒利用重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流动装置（LFD）来直观读取扩增产物。反应体系中包含核酸内切酶IV（nfo）、nfo探针和生物素标记的下游引物。本研究开发了一种多重可视化nfo RPA检测方法，用于同时检测五种牛病毒（BVDV、AKAV、BNoV、BEV和BCoV）。

结果

筛选了nfo RPA检测的最优引物，并对关键反应参数（反应时间和温度）进行了优化。所建立的检测方法显示出高度的特异性、灵敏度和可重复性。最佳反应时间和温度分别确定为20分钟和39°C。检测限（LOD）分别为：BVDV为10¹拷贝/μL，AKAV、BNoV和BCoV为10²拷贝/μL，BEV为10³拷贝/μL。共检测了来自中国吉林省部分地区10个农场采集的200份临床样本。结果表明，nfo RPA-LFD检测方法更为直观和快速。

结论

本研究创建的可视化nfo RPA检测方法适用于牛病毒的高效检测和分析，为特定牛病毒性疾病的现场诊断和控制提供了基本的技术支持。