摘要
基因表达谱分析在阐明分子调控网络和鉴定功能关键基因方面发挥着至关重要的作用。然而，定量实时聚合酶链反应（qPCR）检测的准确性和可靠性从根本上取决于内参基因的稳定选择。冬青属植物轮生冬青（Ilex verticillata）是一种具有重要经济价值的观赏灌木，但其分子层面的研究尚不充分。本研究系统评估了15个候选内参基因在根部、茎部、叶片和果实四种主要组织类型中的表达稳定性。利用原始Ct值，通过四种广泛接受的算法——geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder——对各候选内参基因的表达稳定性进行了严格评估和排序。基于共识排名，初步确定了六个最稳定的候选基因（18S、28S、Actin2、EIF4A、PT和PP2A）。随后，在两个额外的实验条件中对这六个基因进行了验证：不同发育阶段的花蕾样品以及接受一系列植物激素处理的叶片样品。结果表明，Actin2在所有测试条件下表现出最高的整体表达稳定性，28S可作为稳健的替代选择；相比之下，18S的表达稳定性相对较低。为进一步验证所选内参基因的适用性，选取了三个具有生物学意义的目标基因——IvFT、IvAGL19和IvWUS2——进行验证。使用排名第一的单一内参基因Actin2或最优多基因组合进行标准化处理，均可获得高度一致且具有生物学合理性的表达谱。相反，以最不稳定内参基因进行标准化则产生了明显不一致且不可靠的表达模式。综上所述，本研究为基于qPCR的Ilex verticillata花蕾发育和激素响应研究建立了一套严格的、经实验验证的内参基因选择框架。
