《HemaSphere》：SLV-404, an anti-RYK antibody–drug conjugate, is effective in Richter transformation patient-derived xenografts
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Richter转化(RT)是一种源于既往慢性淋巴细胞白血病(CLL)的高度侵袭性淋巴瘤，代表重大未满足临床需求。近期数据显示靶向细胞表面假激酶ROR1的抗体偶联药物(ADC)在RT患者中有效。研究人员探索ROR1家族其他成员，聚焦RYK作为新治疗靶点。转录组分
Richter转化(RT)是一种源于既往慢性淋巴细胞白血病(CLL)的高度侵袭性淋巴瘤，代表重大未满足临床需求。近期数据显示靶向细胞表面假激酶ROR1的抗体偶联药物(ADC)在RT患者中有效。研究人员探索ROR1家族其他成员，聚焦RYK作为新治疗靶点。转录组分析显示RYK在包括RT在内的多种淋巴瘤亚型中表达，而在健康供者外周血单个核细胞(PBMC)中缺失。为增加对高增殖B细胞恶性肿瘤的选择性，载荷选用拓扑异构酶I(TOP1)抑制剂，该酶在侵袭性淋巴瘤高表达、在健康供者PBMC中检测不到。基于此，研究人员构建SLV-404，由靶向RYK胞外域的嵌合抗体、可裂解连接子与强效TOP1抑制剂deruxtecan(DXd)组成。体外研究显示淋巴瘤细胞系与RT患者来源异种移植(RT-PDX)细胞经SLV-404处理后稳定诱导凋亡，正常PBMC完全耐药。体内皮下与静脉RT-PDX模型证实SLV-404显著延长生存、降低肿瘤负荷。上述结果确立RYK为侵袭性RT治疗靶点，并提示SLV-404作为ADC策略治疗侵袭性淋巴瘤的潜力。
研究背景方面，Richter转化(RT)是慢性淋巴细胞白血病(CLL)最具挑战的并发症之一，具有侵袭性强、预后差的特点，传统化疗免疫治疗疗效有限，是突出的未满足临床需求。已有研究证明ROR1靶向抗体偶联药物(ADC) VLS-101/zilovertamab vedotin(ZV)在RT临床前模型中可诱导肿瘤消退并延长生存，且ROR1因在肿瘤细胞表达而正常组织不表达成为理想靶点。ROR1所属非经典Wnt信号受体家族还包括RYK、ROR2与PTK7。研究人员在ROR1靶向经验基础上，分析该家族在B细胞恶性肿瘤中的表达，发现RYK在多种B细胞淋巴瘤及RT患者来源异种移植(RT-PDX)中显著表达，因此开展RYK靶向ADC研究。
研究人员构建并由抗RYK嵌合IgG1抗体SLX-7-H10、可裂解肽连接子GGFG与TOP1抑制剂deruxtecan(DXd)组成、药物抗体比(DAR)为8的ADC即SLV-404，并在RT临床前模型中验证其安全性与抗肿瘤活性。结论为RYK可作为B细胞恶性肿瘤包括RT的新治疗抗原，SLV-404在体外与体内均具强效抗肿瘤作用且对健康细胞毒性低，支持RYK靶向ADC进一步开发与临床评价。该论文发表在《HemaSphere》。
主要关键技术方法概括如下：研究人员利用公开RNA测序数据集分析非经典Wnt家族成员在低级与高级B细胞恶性肿瘤中的表达；以健康供者外周血单个核细胞(PBMC)、多种B细胞恶性肿瘤细胞系及RT-PDX模型（RS1316、RS9737、IP867/17、RS1050）为样本来源，采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)、流式细胞术与免疫印迹评估RYK与TOP1表达；通过体外凋亡实验评价SLV-404对肿瘤细胞与正常淋巴细胞的特异性；体内采用NOD/SCID/γ-chain敲除(NSG)小鼠的皮下与静脉RT-PDX模型，以10 mg/kg SLV-404每周一次共3次给药，评估肿瘤体积、器官播散与Kaplan–Meier生存。
研究结果部分保留小标题并简述。RYK在不同B细胞恶性肿瘤中呈可变表达：研究人员通过公开RNA测序、qRT-PCR、流式细胞术与免疫印迹发现RYK是非经典Wnt家族中表达最丰富的成员，在边缘区淋巴瘤(MZL)、CLL与RT表面表达较高，RT-PDX中可检测且水平不一。TOP1在高增殖细胞中表达增加：研究人员借RNA测序、qRT-PCR与免疫印迹发现TOP1随淋巴瘤级别升高而增高，在伯基特淋巴瘤(BL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)最高，RT-PDX中RS9737与RS1050更高，而健康PBMC中检测不到。SLV-404是靶向RYK递送DXd的ADC：研究人员通过尺寸排阻色谱、反相高效液相色谱(RP-HPLC)与内化实验确认其质量与RYK+细胞时间依赖性内吞。RYK与TOP1在健康供者PBMC中缺失：研究人员用流式、qRT-PCR与免疫印迹证明单核细胞、B/T/NK细胞无RYK表面表达，TOP1蛋白在PBMC不可见。SLV-404体外诱导肿瘤B细胞凋亡而保留正常淋巴细胞：研究人员用Annexin V/碘化丙啶(PI)染色发现细胞系与RT-PDX凋亡显著增加，PBMC各亚群无显著死亡；游离DXd仅在极高浓度损伤正常B/T细胞。SLV-404在皮下RT-PDX模型有效：研究人员在NSG小鼠双 flank 接种后给药，见肿瘤体积迅速下降，IP867/17与RS1050肿瘤消失，各模型中位总生存显著延长，复发细胞体外仍敏感。抗RYK ADC显著减少静脉RT-PDX肿瘤负荷：研究人员尾静脉接种后给药，脑、肺、肝、肾、外周血(PB)无瘤细胞，脾多模型完全缓解，骨髓(BM)残留；CD20免疫组化(IHC)佐证。SLV-404改善静脉RT-PDX生存：研究人员以体重丢失大于20%等为终点，SLV-404使RS1316、RS9737、RS1050中位生存达59、45、42天，最终仍因BM残留复发。
讨论部分总结为，ADC通过抗原识别与细胞毒载荷可控递送在血液恶性肿瘤中价值日增。研究人员此前有ROR1与CD37 ADC经验，本次证明RYK在淋巴肿瘤最持续高表达，但GTEx显示RYK在女性生殖系统等正常组织有表达，不同于ROR1几乎不在成人组织表达；因此选TOP1抑制剂作载荷，可借高增殖细胞选择性拓宽治疗窗。SLV-404体内可清除脾脏病灶并延长生存，但BM作为药理庇护所致残留复发，提示需优化连接子、换用exatecan等更强TOP1抑制剂或联合用药。整体支持RYK为B细胞恶性肿瘤新抗原与SLV-404临床转化依据。
结论部分原文意译：数据支持RYK作为包括RT在内的B细胞恶性肿瘤新治疗抗原。SLV-404在体外与体内展现强效抗肿瘤活性，且对健康细胞毒性极小，为RYK靶向ADC的进一步开发与临床评价提供强证据。
