摘要
本研究旨在探讨循环外泌体在重症急性胰腺炎（SAP）期间肠道屏障功能障碍中的作用，并阐明其潜在的分子机制，特别关注Fkbp5介导的RIPK3/MLKL坏死性凋亡信号通路的抑制作用。研究人员从早期SAP患者和健康对照者中分离血清外泌体，并通过透射电子显微镜（TEM）和纳米颗粒跟踪分析（NTA）进行表征。通过反复腹腔注射促胰液素后给予脂多糖（LPS）诱导小鼠SAP模型，并进行外泌体释放抑制剂GW4869、Fkbp5抑制剂SAFit2及RIPK3抑制剂GSK872的干预处理。采用组织学染色、免疫组化、血清生物标志物检测、肠道通透性试验及转录组测序评估外泌体和Fkbp5对SAP相关肠道损伤的影响。在GW4869处理后进行外泌体重复给药实验，并通过与E-钙黏蛋白的双重免疫荧光染色检测膜相关p-MLKL。SAP患者血清外泌体水平显著升高。SAP小鼠的循环外泌体促进肠道上皮屏障破坏和炎症反应。GW4869处理显著改善胰腺和肠道组织病理损伤，降低血清炎症标志物和肠道通透性，并下调肠道组织中Fkbp5的表达。转录组分析和qRT-PCR验证显示，Fkbp5在SAP小鼠肠道中显著上调。抑制Fkbp5恢复了RIPK3和MLKL的磷酸化，减轻了SAP小鼠的肠道损伤，而抑制FKBP12则未产生保护效果。体外实验显示，SAP来源的外泌体抑制肠道上皮细胞的坏死性凋亡信号，而GW4869逆转了这一抑制作用。在GW4869处理后，重新给予SAP来源但非对照来源的外泌体，部分恢复了胰腺和肠道损伤，伴随肠道FKBP5表达增加、Occludin和Claudin-1表达减少以及膜相关p-MLKL降低。此外，用GSK872抑制RIPK3加重了SAP小鼠的胰腺和肠道损伤。这些发现提示，重症急性胰腺炎中的循环外泌体可能通过上调Fkbp5，抑制坏死性凋亡通路，从而破坏肠道稳态。SAP中的循环外泌体通过上调Fkbp5抑制RIPK3/MLKL坏死性凋亡信号通路，从而加剧肠道屏障功能障碍。靶向外泌体-Fkbp5轴可能为SAP相关肠道损伤提供一种治疗策略。
图形摘要
SAP来源的循环小细胞外囊泡被肠道上皮细胞内化并上调Fkbp5，后者抑制RIPK3/MLKL坏死性凋亡信号。该外泌体-Fkbp5轴在重症急性胰腺炎期间加剧肠道屏障功能障碍和炎症。
利益冲突声明
作者声明不存在利益冲突。
数据可用性声明
RNA测序的原始测序数据已上传至NCBI序列读取档案（SRA，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/），登录号为PRJNA1406025。
