《MicrobiologyOpen》：Prevalence, Molecular Identification, and Antimicrobial Resistance Traits of Pasteurella multocida Isolated From Nasal Swabs of Buffaloes in Bangladesh
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多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是一种重要的水牛呼吸道细菌病原体，可能给畜牧业造成重大经济损失。然而，关于其在孟加拉国的流行率、风险因素和抗菌药物耐药性模式的数据尚缺乏。本研究为横断面研究，共纳入来自孟加拉国七个地点的400头水牛的
多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是一种重要的水牛呼吸道细菌病原体，可能给畜牧业造成重大经济损失。然而，关于其在孟加拉国的流行率、风险因素和抗菌药物耐药性模式的数据尚缺乏。本研究为横断面研究，共纳入来自孟加拉国七个地点的400头水牛的鼻拭子样本。采用培养法进行分离，并通过聚合酶链反应（PCR）进行确认。利用逻辑回归分析探讨感染与风险因素之间的关联；采用纸片扩散法测定抗生素敏感性。通过皮尔逊相关分析评估共耐药模式。基于培养法的P. multocida流行率为12.25%，而PCR确认的流行率为7.25%；所有PCR阳性分离株均为荚膜B型，不同地区流行率存在显著差异。有呼吸道症状的水牛感染几率显著更高（OR=8.88，p<0.001），年龄在1–3岁的年轻动物比更年幼者更易感，但性别与感染无显著关联。抗菌药物敏感性测试显示分离株表现出高水平的抗生素耐药性，尤其对氨苄西林（96.55%）、土霉素（93.10%）和青霉素G（89.65%）耐药。相比之下，头孢克肟（93.10%）和阿奇霉素（68.96%）仍保持较高的有效性。β-内酰胺类、四环素类和氨基糖苷类药物之间的耐药性呈正相关。这些发现表明，多重耐药（MDR）的P. multocida B型正在孟加拉国的水牛中传播，凸显了加强监测、合理使用抗菌药物以及实施综合控制策略的必要性。
论文解读文章
一、研究背景与目的
多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是全球范围内一种常见的水牛呼吸道致病菌，可引起出血性败血症（HS）或肺炎型巴氏杆菌病，给畜牧业带来重大经济损失。在孟加拉国，水牛养殖对农村经济和蛋白质供应至关重要，但兽医基础设施薄弱、生物安全措施不足以及新兴传染病等问题严重制约了产业发展。尽管该病原体在亚洲尤其是孟加拉国经常引发疫情，但针对该国水牛群中P. multocida的鼻部携带情况、分子特征及其对抗菌药物耐药性（AMR）的系统性数据十分匮乏。既往研究多集中于粪便携带、乳腺炎或混合物种调查，水牛样本量有限，且缺乏大规模的分子鉴定工作。因此，研究人员开展此项研究，旨在确定孟加拉国特定区域水牛鼻拭子中P. multocida的流行率，利用分子技术验证其身份，并分析其抗生素敏感性谱，以期为扩大诊断、治疗和管理水牛呼吸道感染提供基础数据，并助力国家层面的AMR监测计划。
二、研究方法概述
本研究是一项横断面调查，于2023年9月至2024年8月期间，在孟加拉国锡尔赫特县的六个乡（Zakiganj、Companiganj、Fenchuganj、Golapganj、Gowainghat和Jaintapur）以及诺阿卡利的Hatia乡（Swarna Dweep）共七个地点进行。研究人员无菌采集了400头不同年龄、性别和健康状况水牛的鼻拭子样本。主要关键技术方法包括：
- 1.
细菌分离与表型鉴定：将样本在选择性脑心浸液肉汤中富集后，基于菌落形态、革兰氏染色和生化特性进行初步鉴定。
- 2.
分子确认与荚膜分型：提取基因组DNA，使用Pasteurella特异性引物（KMT1T7/KMT1SP6）进行聚合酶链反应（PCR）分子确认，随后利用特异性引物（KTT72/KTSP61和CAPE/CAPE）进行荚膜B型和C型的PCR分型。
- 3.
抗菌药物敏感性测试（AST）：采用Kirby-Bauer纸片扩散法，在Mueller-Hinton琼脂上进行，抑菌圈直径依据临床和实验室标准协会（CLSI）指南判读。多重耐药（MDR）定义为对三个或以上抗生素类别不敏感。
- 4.
数据分析：使用R语言进行统计分析，包括卡方检验、逻辑回归分析和皮尔逊相关分析。
三、研究结果
3.1 P. multocida的流行率
在400份鼻拭子样本中，通过细菌培养和生化筛选检出49份阳性，其中29份经PCR靶向KTT72和KTSP61基因确认。PCR确认的流行率为7.25%（95% CI: 4.91–10.25），而基于培养和生化筛选的流行率为12.25%。
3.2 P. multocida的地理分布
各研究区域的流行率存在差异。培养法检测结果显示，流行率从Golapganj的7.55%到Zakiganj的19.64%不等。分子确认结果显示，Companiganj未检出阳性（0.00%），而Zakiganj最高（14.29%）。所有PCR阳性分离株均被归类为P. multocida荚膜B型感染。
3.3 流行病学变量与分子流行率的关联
年龄方面，1–3岁水牛的P. multocida流行率最高（9.78%），其感染几率显著高于小于1岁的水牛（OR=3.94, p=0.031）；大于3岁的水牛感染几率无显著差异。性别方面，雄性水牛流行率（8.79%）略高于雌性（5.96%），但无统计学显著关联。呼吸健康状况方面，有呼吸道症状的水牛流行率高达18.48%，显著高于健康水牛的2.49%（OR=8.88, p<0.001）。
3.4 P. multocida的AMR模式
抗菌药物敏感性测试显示，分离株对氨苄西林（AMP）的耐药率最高（96.55%），其次为土霉素（OTC）（93.10%）和青霉素G（PCG）（89.65%）。对链霉素（79.31%）、磺胺甲噁唑-甲氧苄啶（65.52%）、庆大霉素（GEN）（55.17%）和氯霉素（51.72%）也表现出较高耐药率。相比之下，头孢克肟（CFM）的敏感率最高（93.10%），阿奇霉素的敏感率为68.96%。
3.5 AMR模式的相关性分析
皮尔逊相关分析揭示了显著的耐药性共现模式。PCG与AMP之间存在强正相关（r=0.81, p<0.001），表明β-内酰胺类药物间高度交叉耐药。GEN与OTC之间存在强相关性（r=0.80, p<0.001）。AMP与OTC（r=0.69, p<0.01）以及AMP与链霉素（r=0.56）也存在中等至强的相关性。CFM与GEN之间观察到罕见的负相关（r=?0.40）。
四、讨论与结论
讨论总结：本研究发现PCR确认的P. multocida流行率（7.25%）低于培养法（12.25%），这可能反映了细菌载量、DNA质量或PCR抑制物的影响，表型鉴定也可能存在局限性。与其他地区的研究相比，本研究的流行率处于中等水平，可能与免疫程序不力、诊断延迟和抗生素治疗不足有关。地理分布差异可能归因于各地管理和卫生条件的差异。有呼吸道症状的水牛感染几率高出约九倍，证实了P. multocida作为呼吸道病原体的作用。1–3岁水牛感染风险增加，可能与断奶、运输、环境变化等应激因素导致免疫力下降有关。母源抗体可能保护了一岁以下犊牛。性别并非独立的感染风险决定因素。抗菌药物敏感性测试结果表明，常用的一线经验性抗生素（如AMP、OTC、PCG）已面临极高耐药率，这很可能源于长期、不规范的使用所施加的选择压力。相比之下，头孢克肟（CFM）和阿奇霉素仍保持较好效果，但需谨慎使用以避免耐药性快速发展。耐药性间的强正相关性表明，耐药基因可能位于可移动遗传元件上，在抗生素压力下被共同选择。研究局限性在于仅进行了分子鉴定和荚膜分型，未开展毒力基因谱、多位点序列分型或全基因组测序等更深层次的基因型研究，且AMR分析仅限于表型方法，未鉴定相关基因或可移动遗传元件。
研究结论翻译：本研究详细阐述了孟加拉国水牛群中P. multocida的流行率、风险因素及相关抗生素耐药性。通过培养和分子鉴定，证明了P. multocida是一种重要的呼吸道病原体。地理差异凸显了管理技术、卫生实践和地方饲养方式对疾病发生的影响。呼吸道症状与感染之间的密切关联强调了早期识别和治疗的重要性。年龄和性别并非最重要因素，但1–3岁水牛明显更易感，表明该群体属于高风险类别。这些结果表明，针对性的预防干预措施，如在高风险期进行疫苗接种和改善管理，可大幅减轻疾病负担。P. multocida分离株普遍存在的多重耐药（MDR）现象是一个重大关切，尤其是对青霉素G（PCG）、氨苄西林（AMP）和土霉素（OTC）等常用抗生素。相关性研究发现多种共耐药模式，表明耐药决定因子很可能相互关联并被共同选择，这使得有效治疗变得极为困难。即使头孢克肟（CFM）和阿奇霉素仍然相当有效，也必须谨慎使用。所有数据均表明，迫切需要加强抗菌药物管理、在治疗前进行系统性药敏试验，并强化生物安全和免疫接种计划。为了控制巴氏杆菌病并防止耐药P. multocida菌株在水牛生产系统中传播，必须将分子诊断与AMR监测相结合。
