《Microorganisms》：Sheep-Associated Malignant Catarrhal Fever in an Exotic Rusa Deer (Cervus timorensis): Implications for Wildlife Health in Southern Brazil
编辑推荐：
羊相关恶性卡他热（sheep-associated malignant catarrhal fever, SA-MCF）是由绵羊γ疱疹病毒2（ovine gammaherpesvirus 2, OvGHV2）引起的、常致死的、泛嗜性、淋巴增殖性疾病，绵羊为其无
羊相关恶性卡他热（sheep-associated malignant catarrhal fever, SA-MCF）是由绵羊γ疱疹病毒2（ovine gammaherpesvirus 2, OvGHV2）引起的、常致死的、泛嗜性、淋巴增殖性疾病，绵羊为其无症状储存宿主。尽管已知Rusa鹿（Cervus timorensis）在其他地区对OvGHV2高度易感，但巴西该物种中尚无病例记录。本报告描述了巴西南部一只圈养Rusa鹿自发发生OvGHV2感染，并讨论其对野生动物的可能影响。同一养殖场的3只鹿在无既往临床症状的情况下突然死亡。这些动物没有已知的绵羊或山羊接触史，但处于一个流行病学生态位：亚临床感染的自由活动野猪（free-ranging wild boars, FRWBs）和牛中检测到OvGHV2。其中1只鹿被提交进行常规死后评估。大体病变包括消化道溃疡性和糜烂性病变、肺水肿及明显的脑膜充血。组织病理学显示糜烂性和溃疡性食管炎、皱胃炎、瓣胃炎和瘤胃炎，并伴有非化脓性脑膜脑炎以及多个器官的血管炎，符合SA-MCF。对脑组织进行分子检测，通过定量PCR（qPCR）检测到OvGHV2 DNA。此外，PCR检测扩增到OvGHV2被膜蛋白（ORF75）和糖蛋白（gB）基因的部分片段。未检测到其他反刍动物神经系统病原，包括BoAHV5、BVDV、单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）、Histophilus somni和狂犬病病毒。此外，基于ORF75和gB基因的系统发育分析显示，本研究获得的核苷酸序列与OvGHV2参考株及其他来自不同地理区域反刍动物的毒株聚类，并具有较高的序列同源性。无绵羊接触史，结合同一流行病学生态位内FRWBs和牛存在亚临床OvGHV2感染的先前证据，提示替代野生动物储存宿主或桥梁宿主参与病毒传播。此外，这些结果扩展了OvGHV2在巴西的宿主范围，凸显外来鹿科动物对SA-MCF的易感性，并强调在多种易感物种共存的地区需要采取野生动物-家畜一体化监测策略。
恶性卡他热（malignant catarrhal fever, MCF）是由MCF病毒复合体（MCF virus complex, MCFV）成员引起的严重、常致死性、淋巴增殖性传染病。相关病毒包括绵羊γ疱疹病毒2（ovine gammaherpesvirus 2, OvGHV2）以及角马疱疹病毒1和2（alcelaphine gammaherpesvirus 1 and 2, AlGHV1和AlGHV2）等。OvGHV2引起羊相关恶性卡他热（sheep-associated malignant catarrhal fever, SA-MCF），无症状绵羊是病毒携带者，感染可发生于多种终末宿主，传统认为主要与接触羔羊鼻分泌物有关。然而，该理论不能解释在巴西及其他无报告无症状绵羊宿主地区多种动物中检测到OvGHV2的现象。OvGHV2具有泛嗜性，全球已从牛、野牛、水牛、鹿、猪和马等哺乳动物中诊断，并在牛、水牛、鹿、自由活动野猪（free-ranging wild boars, FRWBs）和野牛等中报道亚临床感染。巴西先前主要在牛等家畜中诊断SA-MCF和/或OvGHV2亚临床感染，也见于马、水牛、猪、FRWBs和绵羊。巴西南部FRWBs中检测到OvGHV2相关感染，提示需研究其在病原传播中的可能作用及对野生动物和家养反刍动物的溢出风险。全球多种鹿科动物对OvGHV2感染和SA-MCF易感，Rusa鹿（Cervus timorensis）在澳大利亚已有报道，但巴西该物种此前无记录。Rusa鹿原产印度尼西亚，1930年至1970年间引入巴西，属外来鹿科动物。巴西此前有两起鹿的OvGHV2相关感染报告：1994年Mato Grosso州褐小鹿（Mazama gouazoubira）暴发，60%（6/10）突然死亡；2017年Rio de Janeiro州水鹿（Rusa unicolor）暴发，82.6%（19/23）出现神经表现后死亡；两者均饲养于含绵羊区域。本研究目的为：描述巴西圈养Rusa鹿首例SA-MCF，并讨论该特定流行病学生态位对野生动物的可能影响。
研究人员开展的研究及结论：2024年冬季，巴西南部Paraná州Piraquara市一处私人农村地产中3只Rusa鹿在6周内突然死亡，无既往明显临床表现；第2只死亡鹿被送检。该地产不饲养绵羊或山羊，但先前数据显示附近有FRWBs活动，且该地区FRWBs亚临床感染OvGHV2，可能作为桥梁宿主。研究通过病理学和分子检测确认该鹿感染OvGHV2，符合SA-MCF；结论为其为巴西该物种首例SA-MCF，且无已知绵羊或山羊接触史，提示替代野生动物储存宿主或桥梁宿主可能参与传播；结果扩展OvGHV2在巴西的宿主范围，凸显外来鹿科动物易感性和野生动物-家畜一体化监测需求。
主要关键技术方法（不超过250字）：样本来源为巴西南部Piraquara一处私人农场圈养Rusa鹿；FRWB目击数据来自Kmetiuk et al. 2023先前研究。对死亡成年雌鹿进行大体剖检和HE组织病理学检查。脑组织核酸用于qPCR检测OvGHV2、BoAHV5、BVDV、Listeria monocytogenes和Histophilus somni，并RT-PCR和免疫荧光检测狂犬病病毒。PCR扩增OvGHV2被膜蛋白ORF75和糖蛋白gB部分片段，产物纯化后直接测序，构建核苷酸同一性矩阵和最大似然系统发育树（ORF75为327 nt，gB为2164 nt）。用QGIS进行空间制图和缓冲分析。
研究结果：
3.1 大体和组织病理学发现：大体见食管、瘤胃、皱胃、网胃和瓣胃溃疡和/或糜烂，肺水肿和充血，脑膜血管严重充血，脑回扩张、脑沟变浅，肝轻度肿大伴切面苍白区。组织病理见糜烂性和溃疡性食管炎、皱胃炎、瓣胃炎和瘤胃炎，中度门管区淋巴浆细胞性肝炎，轻度多灶性淋巴浆细胞性间质性肾炎。大脑和小脑均有病变，大脑更严重，包括由一层淋巴细胞形成的血管套、神经元坏死灶、中度皮质水肿、神经毡和脑膜中重度充血、脑膜轻度淋巴浆细胞浸润，即轻至中度多灶性淋巴浆细胞性脑膜脑炎；肺部见淋巴浆细胞性血管炎，与SA-MCF一致。
3.2 OvGHV2的分子检测：脑组织qPCR检测OvGHV2为阳性，Cq值26.61，表明病毒粒子数量较高。PCR扩增到ORF75和gB基因目标片段，毒株命名为OvGHV2/BRA/PR-Rusa-Deer/24，序列登录GenBank（ORF75为PZ896339；gB为PZ878946）。Histophilus somni、Listeria monocytogenes、BVDV和BoAHV5 qPCR均未扩增；狂犬病病毒免疫荧光和RT-qPCR阴性。
3.3 绵羊γ疱疹病毒2 ORF75和gB株的分子特征：基于ORF75的系统发育分析形成3个簇，本研究毒株与墨西哥鹿（ON375580）和牛（ON375581）、台湾Formosan sambar deer（PV231823）、南非牛（EU851177）以及巴西Atlantic生物群系牛（OP121120、PP059654）和Amazon生物群系牛（KJ658293）聚类。ORF75核苷酸同一性显示，本株与上述毒株100%一致，与OvGHV2参考株（NC007646）99.3%相似。gB系统发育分析显示，本株形成亚簇，包含巴西Amazonia（UEL/MT）和Caatinga（UEL/RN）生物群系牛、美国羊（AF385442）和牛（AF385439）；该亚簇似源于含参考株、台湾Formosan sambar deer（PV231823）、美国牛（AF385441）、羊（OR670951）和野牛（AF385440）的簇。gB核苷酸同一性显示，本株与巴西Caatinga生物群系（UEL/RN）和美国羊（AF385441）99.4%同源，与美国羊（OR670951）、牛（AF385439）和台湾鹿（PV231823）99.3%相似，与野牛（AF385440）和Amazon生物群系牛（UEL/MT）99.2%一致，与gB参考株（NC007646）98.8%同源。
3.4 流行病学和空间成像发现：ADAPAR农业普查数据表明该地理生态位存在大量饲养绵羊的农场和/或农村地产，以及FRWBs目击区域；绵羊饲养为半集约系统，动物多饲养于有围栏的封闭区域。空间分析显示，FRWBs目击点距Rusa鹿栖息地不足5 km，最近绵羊场距Rusa鹿至少1 km。鹿圈南侧部分为混凝土围栏，北侧为铁丝围栏，附近有原生林和种植林。
讨论部分总结：本报告记录巴西南部圈养Rusa鹿自发OvGHV2感染，为巴西该物种首例SA-MCF，是世界范围内该鹿种第2次确认OvGHV2感染，也是Rusa鹿远离自然栖息地的第2次SA-MCF检测。该鹿无已知绵羊或山羊接触史，与巴西先前两起鹿SA-MCF以及澳大利亚Rusa鹿病例中感染鹿接触绵羊不同，挑战了传统SA-MCF传播认识，提示需考虑替代流行病学途径和额外宿主。大体和组织病理与OvGHV2感染一致，多个分子检测确认感染。基于ORF75和gB的系统发育分析显示本株与参考株及不同地理来源株聚类且同源性高；gB分析中多物种聚类与宿主适应和可能跨种传播有关。消化道广泛溃疡常见于SA-MCF头眼型，提示该动物可能为该表现。未检出其他常见反刍动物神经病原。该病例为巴西野生动物中少数确认OvGHV2的案例之一，可能为南美鹿中第3例OvGHV2和/或SA-MCF特征。无绵羊接触的圈养鹿中检测到OvGHV2，感染来源未明，类似巴西和其他国家先前暴发；已有证据提示FRWBs可能参与巴西南部OvGHV2流行病学循环。3只鹿突然死亡，鹿SA-MCF典型呈超急性；6周内死亡提示全部动物可能感染，若全感染则发病率100%、死亡率和致死率100%，若仅评估鹿则发病率33.3%、死亡率和致死率100%，但动物数少需谨慎解释。脑炎症提示急性神经综合征，脑受累为头眼型一部分。鹿自然感染OvGHV2通常无典型临床表现而死亡。野生动物管理和One Health方面，圈养无羊条件下检测到OvGHV2，需重新评估巴西南部野生动物健康监测框架；FRWBs可能作为替代宿主或桥梁物种，但其桥梁宿主理论仍需验证；FRWBs已知可传播经典猪瘟病毒、猪圆环病毒、甲型流感病毒、戊型肝炎病毒、弓形虫病、沙门菌病、钩端螺旋体病、布鲁菌病、结核病和旋毛虫病，因此不能完全忽视其作为OvGHV2潜在传播者的可能。其他非传统传播方式包括美国野牛SA-MCF中气溶胶和鸟类及污染物参与、瑞士亚临床水牛作为储存宿主直接传播、水牛间直接接触、新西兰鹿间直接接触、美国野牛间传播及巴西南部奶牛间可能传播。总体而言，OvGHV2感染和/或SA-MCF流行病学尚未明确，病毒传播可能适应特定生态位，绵羊和/或山羊可能不是唯一无症状宿主。该报告强调巴西南部野生动物-家畜界面病原传播复杂性；同一生态位中奶牛慢性毛囊炎、无羊接触血清阳性奶牛、亚临床FRWBs以及Rusa鹿均确认OvGHV2，提示病毒在巴西分布可能比先前认识更广。管理上，从One Health角度需增强野生动物和家畜OvGHV2监测，管理农场-野生动物界面，分离和限制绵羊与易感野生动物接触，采取生物安全措施限制野生动物进入圈养鹿围栏，监测FRWBs并进行OvGHV2等病原分子筛查，提高兽医、诊断者和野生动物管理者对非典型传播途径的认识，并促进野生动物机构、家畜生产者、猎人和环境部门合作。
结论部分翻译：该病例通过证明SA-MCF可在无直接接触绵羊的外来鹿科动物中发生，扩展了对巴西OvGHV2的流行病学认识，提示可能存在涉及野生动物储存宿主的替代传播途径。这些发现强调，在野生动物、家畜和圈养外来物种共存的地区，需采用一体化监测和管理策略以减轻OvGHV2传播。此外，在圈养且无已知绵羊暴露的鹿中检测到OvGHV2，挑战了巴西南部对SA-MCF传播的传统认识。该病例提供证据表明，该地区OvGHV2的流行病学循环超出经典绵羊-易感宿主界面。因此，必须深入研究替代传播形式。因此，继续研究OvGHV2在不同宿主物种中的生态学，对于理解传播途径全貌和制定更有效措施以减轻该地区MCF影响至关重要。研究局限性指出，本研究报告单例圈养Rusa鹿OvGHV2感染，另外两只动物未进行OvGHV2检测，所有者未提交其他动物进行病理评估；因所有鹿在6周内突然死亡且鹿对OvGHV2高度易感，作者认为全部动物感染具有合理性；这些发现扩展了巴西OvGHV2宿主范围并挑战传统传播途径，涉及FRWB假说。
