基于硼酸酯亲和微球与两性霉素B-时间分辨荧光微球偶联的夹心法检测白色念珠菌

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Detection of Candida albicans by a sandwich assay using boronate affinity microspheres coupled with amphotericin B-time-resolved fluorescent microspheres

　　

摘要

白念珠菌（C. albicans）是一种机会致病性真菌，对公共卫生和食品安全构成威胁，而常规检测方法存在成本高、程序复杂和灵敏度不足的问题。在此，通过整合苯硼酸功能化磁性微球（PFSEPD）和两性霉素 B 标记的时间分辨荧光微球（ATFM），构建了一种新型无生物分子夹心检测平台，以定量检测白念珠菌。PFSEPD 的分步合成通过多种表征得到了验证，所制备的 PFSEPD 表现出良好的单分散性、快速的磁性响应和低的制备成本，吸附数据与朗格缪尔等温线和准二级动力学模型拟合良好。同时，ATFM 信号探针是通过将两性霉素 B（AmB）共价接枝到羧基化时间分辨荧光微球（TFM）上合成的。在建立的“双重化学识别”夹心系统中，PFSEPD 通过硼酸酯-顺式二醇特异性亲和力快速捕获真菌，而 ATFM 通过 AmB-麦角固醇相互作用选择性地标记被捕获的白念珠菌。经 SDS 缓冲液洗脱后，定量测量了释放的 ATFM 的荧光信号。PFSEPD-ATFM 检测策略在牛奶和蜂蜜中分别达到了 46 和 40 CFU mL^?1 的检测限（LODs），回收率为 96.2%–101.8%，相对标准偏差（RSDs）小于 5.0%。这种“双重化学识别”夹心系统为白念珠菌的快速定量检测提供了一种简便、灵敏的替代方案。

图形摘要

白念珠菌（C. albicans）是一种机会致病性真菌，对公共卫生和食品安全构成威胁，而常规检测方法存在成本高、程序复杂和灵敏度不足的问题。在此，通过整合苯硼酸功能化磁性微球（PFSEPD）和两性霉素 B 标记的时间分辨荧光微球（ATFM），构建了一种新型无生物分子夹心检测平台，以定量检测白念珠菌。PFSEPD 的分步合成通过多种表征得到了验证，所制备的 PFSEPD 表现出良好的单分散性、快速的磁性响应和低的制备成本，吸附数据与朗格缪尔等温线和准二级动力学模型拟合良好。同时，ATFM 信号探针是通过将两性霉素 B（AmB）共价接枝到羧基化时间分辨荧光微球（TFM）上合成的。在建立的“双重化学识别”夹心系统中，PFSEPD 通过硼酸酯-顺式二醇特异性亲和力快速捕获真菌，而 ATFM 通过 AmB-麦角固醇相互作用选择性地标记被捕获的白念珠菌。经 SDS 缓冲液洗脱后，定量测量了释放的 ATFM 的荧光信号。PFSEPD-ATFM 检测策略在牛奶和蜂蜜中分别达到了 46 和 40 CFU mL^?1 的检测限（LODs），回收率为 96.2%–101.8%，相对标准偏差（RSDs）小于 5.0%。这种“双重化学识别”夹心系统为白念珠菌的快速定量检测提供了一种简便、灵敏的替代方案。

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