开发多重重组酶聚合酶扩增联用侧向流检测法（mRAA-LFD）以快速鉴定梭子蟹科三种梭子蟹

《Food Analytical Methods》：Development of multiplex RAA coupled with lateral flow detection (mRAA-LFD) for rapid identification of three swimming crab species of Portunidae family

　　

摘要

具有商业价值的梭子蟹类蟹肉产品容易遭受以经济为动机的掺假和物种替代，因为去除外骨骼特征以及后续加工使得可靠的形态学鉴别无法实现。本研究开发了一种快速的等温多重重组酶辅助扩增耦合侧向层析检测（mRAA-LFD）方法，用于同时鉴别Portunus pelagicus（PP）、P. sanguinolentus（PS）和Charybdis feriata（CF）。特异性引物组基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基I（COI）基因的多态性区域设计，产生特征性扩增片段，分别为147 bp（PP）、117 bp（PS）和176 bp（CF），并通过整合生物素标记、TAMRA标记和Cy5标记的引物实现多重侧向层析检测。最佳多重扩增条件为37°C下反应30分钟，随后在5至10分钟内完成LFD目视检测。该方法具有分析特异性，仅对目标蟹种产生阳性信号，与目标以外的甲壳类物种未出现交叉反应。各蟹种的检测限为：PP的RAA为0.4 ng/反应、LFD为0.2 ng/反应；PS为0.4 ng/反应；CF的RAA和LFD均为0.1 ng/反应。所有热处理蟹样品均可成功鉴别，不受各种烹饪处理方式的影响。商业产品分析显示，15个样品中有13个（86.7%）被正确标识为P. pelagicus，证明了该方法在复杂食品基质中物种鉴别的适用性及实际的海产品溯源应用。总体而言，所开发的mRAA-LFD方法提供了一个快速、灵敏且无需复杂设备的现场梭子蟹物种鉴别平台，为海产品溯源、标签验证及食品欺诈防范提供了实用工具。