巴西库亚巴城市绿地食果蝙蝠 Artibeus planirostris 的血液学评估：自动与手动方法的一致性比较及血细胞形态特征

《Veterinary Research Communications》：Comparison of manual and automated methods in the hematological evaluation of a frugivorous bat captured in urban green areas

　　

不断增加且缺乏规划的城市化可能加剧野生动物与人类及家养动物的接触，引发对人兽共患病原体（zoonotic pathogens）外溢的担忧。蝙蝠因其生态位多样性高和分布广泛而具有重要生态作用，并可能作为多种病原体的储存宿主。尽管其重要性，非吸血蝙蝠（non-hematophagous bats）的血液学值仍有限，阻碍了对它们健康状况和生理反应的评估。本研究表征了在巴西库亚巴城市绿地捕获的 Artibeus planirostris 的血液学参数和血细胞形态，并评估了自动与手动血液学方法之间的一致性。研究人员使用自动血液分析仪（automated hematology analyzer）、微量血细胞比容法（microhematocrit）、氰化高铁血红蛋白测定（cyanmethemoglobin assay）和血涂片显微镜检查（blood smear microscopy）对24只蝙蝠的血液样本进行分析，用于白细胞分类计数（differential leukocyte counts）、血小板估算（platelet estimation）和形态学评估（morphological assessment）。红细胞参数（erythrogram）值与先前在蝙蝠中报道的模式一致，并可能反映对飞行代谢的生理适应。超过一半的个体显示中性粒细胞（neutrophil）多于淋巴细胞（lymphocyte）；然而，不能排除捕获相关应激、感染和麻醉效应的影响。Bland-Altman分析和相关性分析显示，自动与手动方法之间具有可变的一致性。尽管一些参数显示出良好相关性，但系统偏倚（systematic biases）和高变异性表明两种方法之间的可互换性（interchangeability）有限。这些发现强调需要谨慎解释蝙蝠的自动血液学分析，并支持自动和手动方法的联合使用。需要更大样本量的进一步研究，以改进方法标准化，并为人类化环境（anthropized environments）中的蝙蝠建立有代表性的血液学参考数据。

研究背景方面，随着城市化与环境变化加剧，野生动物面临栖息地丧失，并与人类及家养动物接触增多，可能导致人兽共患病原体（zoonotic pathogens，可从动物传播给人并引起感染的病原体）出现。翼手目（Chiroptera）物种多样性高，具有种子传播、昆虫控制和授粉等生态作用；其生态可塑性和对人类化环境的适应也可能增加其暴露于应激源和病原体的机会。血液学评估有助于判断健康与生理状态，可识别贫血、炎症、感染、慢性状况和脱水等。然而，非吸血蝙蝠（non-hematophagous bats，不以血液为食的蝙蝠）的血液学数据仍有限，Artibeus planirostris 这一新热带食果蝙蝠的血液学参数和血细胞形态研究尤其不足，城市环境中的数据更少。此外，自动血液分析仪在该物种中的适用性和与手动方法的一致性尚不清楚，因为物种特异性血液特征可能影响分析准确性。基于此，研究人员旨在描述巴西库亚巴城市绿地捕获的 A. planirostris 的血液学参数和血细胞形态，并比较自动与手动/半自动方法的一致性和适用性。

研究人员在2025年1月和3月两个夜间采样事件中，于巴西马托格罗索州库亚巴的两个地点采样：马托格罗索联邦大学野生动物医学与研究中心，以及 M?e Bonifácia 州立公园。共捕获44只蝙蝠，其中24只 A. planirostris 符合纳入标准；排除凝血或纤维蛋白形成样本及其他物种个体。24只中雌性4只、雄性20只，幼体4只、成体20只。研究人员得出结论：红细胞参数与既往蝙蝠报道模式一致，可能反映飞行代谢的生理适应；超过半数个体中性粒细胞多于淋巴细胞，但捕获相关应激、感染和麻醉效应不能排除；自动与手动方法一致性可变，部分参数相关性较好，但存在系统偏倚和高变异性，方法间可互换性有限。该研究强调蝙蝠自动血液学分析需谨慎解释，支持自动与手动方法联合使用。其意义在于提供巴西马托格罗索州食果蝙蝠的首次血液学描述，并为未来研究和人类化环境中蝙蝠血液学参考数据的建立提供基线资料。

关键技术方法概括（不超过250字）：研究样本来自巴西库亚巴两个城市绿地/城市保护区，2025年1月和3月夜间采样，捕获44只蝙蝠，24只 A. planirostris 纳入。研究人员采用自动血液分析仪（pocH-100iV Diff，Sysmex）在“OTHER”研究模式下检测总红细胞、白细胞、血小板、血细胞比容、血红蛋白、平均红细胞体积（Mean Corpuscular Volume，MCV）和平均红细胞血红蛋白浓度（Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration，MCHC）；以微量血细胞比容法（microhematocrit）测血细胞比容，以氰化高铁血红蛋白（hemiglobin cyanide，CiCN）法测血红蛋白；血涂片经 Diff-quick 染色后显微镜检查，进行白细胞分类计数、血小板估算和形态学评估；用 Shapiro-Wilk 检验、Pearson 或 Spearman 相关、Bland-Altman 分析及 Benjamini-Hochberg 多重比较校正进行统计。

研究结果如下。血液学参数与红细胞形态方面，24只 A. planirostris 的血液学参数被测定；红细胞形态总体正常，以正细胞正色素为主。然而，41.6%（10/24）个体可见棘红细胞（echinocytes）。1只个体红细胞计数、血红蛋白浓度和血细胞比容较低，自动分析仪测得分别为8.28 × 10⁶/μL、14.20 g/dL和45.90%；氰化高铁血红蛋白法测得血红蛋白18.36 g/dL，微量血细胞比容法测得血细胞比容44.00%。该个体还表现红细胞大小不均（anisocytosis），可能代表个体差异。白细胞分类与形态方面，中性粒细胞在58.3%（14/24）个体中为最常见白细胞，其次为淋巴细胞，占41.7%（10/24）。中性粒细胞胞质无颗粒或颗粒减少，核染色质致密；淋巴细胞体积小、核/胞质比高，核呈圆形至椭圆形。平均中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil:lymphocyte ratio，N: L）为1.68 ± 0.24，范围为0.14至3.81。嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和单核细胞数量较少；嗜酸性粒细胞有小而离散的粉色颗粒，嗜碱性粒细胞有更明显的嗜碱性颗粒；单核细胞颜色和大小在个体间及个体内可变，胞质蓝色至灰色，染色质较中性粒细胞浅，核形状不规则。25%（6/24）个体可见活化单核细胞，伴不同程度胞质空泡。血小板与血浆蛋白方面，6只个体因中度至重度血小板聚集而排除血小板计数。另在1只个体观察到血小板包涵体和巨大血小板。1份样本因溶血未能测定总血浆蛋白。自动与手动方法相关性方面，Pearson相关分析显示血红蛋白（r = 0.728，p < 0.001）和血细胞比容（r = 0.813，p < 0.001）分别呈一般和良好一致性。Spearman相关分析中，淋巴细胞绝对计数相关性最强（rs = 0.948，p < 0.001），其次为淋巴细胞百分比（rs = 0.835，p < 0.001）、“其他”白细胞百分比（中性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞）（rs = 0.817，p < 0.001）及“其他”白细胞绝对计数（rs = 0.829，p < 0.001）。血小板计数呈一般相关（rs = 0.609，p = 0.002）。相反，嗜酸性粒细胞百分比（rs = ?0.130，p = 0.546）和嗜酸性粒细胞绝对计数（rs = 0.075，p = 0.727）在方法间无显著相关，提示分析仪可能不能可靠识别蝙蝠该白细胞群。经 Benjamini-Hochberg 校正后，前述7个显著相关仍显著，嗜酸性粒细胞两项仍不显著。Bland-Altman一致性方面，自动与手动方法间一致性可变。血红蛋白呈负偏倚（?3.75 g/dL），提示自动分析仪所得值较低；血细胞比容呈正偏倚（+6.87%）。血小板计数呈明显正偏倚（+372.8 × 10³/μL）且一致性界限宽，提示方法间高变异性。淋巴细胞百分比呈正偏倚，“其他”白细胞百分比呈持续负偏倚。嗜酸性粒细胞计数一致性界限宽、方法间一致性差。相比之下，淋巴细胞绝对计数一致性界限较窄，方法间一致性较好。

讨论部分总结：该研究对巴西中部城市绿地 A. planirostris 的自动与手动血液学方法进行了比较评估。总体而言，不同血液学参数的方法一致性可变，而血细胞形态和白细胞特征与既往蝙蝠报道大体一致。血细胞比容、血红蛋白和红细胞值与蝙蝠既往血液学模式一致，可能反映持续飞行代谢需求的生理适应，但也需谨慎解释脱水或生理变异的影响。棘红细胞在41.6%个体中出现，既往在果蝠 Pteropodid 蝙蝠中有报道，可能关联制备伪影、EDTA过量、脱水或应激。1只个体红细胞参数较低并伴红细胞大小不均，提示贫血，类似其他蝙蝠物种的描述。白细胞分析显示超过半数个体中性粒细胞百分比高于淋巴细胞百分比，N: L 比值大于1，类似其他蝙蝠物种，包括 Artibeus spp.。该模式可能与捕获和处理相关应激反应有关，N: L 比值被用作应激的间接指标。尽管许多蝙蝠物种常见淋巴细胞占优，但本研究中中性粒细胞占优更常见，可能反映捕获与处理程序、麻醉方案、环境条件、评估物种或群体、或其他方法学差异。本研究所用赛拉嗪和氯胺酮麻醉可能增加总白细胞计数并诱导类似应激反应的白细胞图变化；蝙蝠中麻醉对血液学参数影响的信息仍少。单核细胞形态典型，部分个体可见活化形式，可能见于正常家养动物，也可能提示炎症或感染过程。1只个体血小板内观察到与 Anaplasma sp. 相符的嗜碱性包涵体，类似城市蝙蝠既往报道，但确诊需分子检测，因为其与染料沉淀或核碎片相似；同一动物还见巨大血小板，其在蝙蝠中的临床意义未知，在犬中与血小板再生增加有关，在猫中可能为生理性发现。Bland-Altman和相关性分析显示自动与手动方法一致性可变；即使血细胞比容和淋巴细胞计数相关性良好，相关性本身并不表明方法可互换，因为还存在系统偏倚。自动分析仪测得的血红蛋白持续低于 CiCN 法，而血细胞比容呈正偏倚，差异可能反映技术方法差异、物种特异性红细胞特征及样本处理和分析时间等分析前因素。所用分析仪最初为家养哺乳动物开发，其分析性能可能受翼手目血液学特征影响。血小板和嗜酸性粒细胞计数方法间一致性差、变异性高；血小板差异可能与聚集和阻抗系统干扰有关，嗜酸性粒细胞低一致性提示蝙蝠白细胞分化存在局限。显微镜评估提示，分析仪分类为大型白细胞的细胞常对应单核细胞，提示可能白细胞误分类；自动白细胞分类不能直接与显微镜 N: L 比值比较，因为分析仪将中性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞归为单一类别，而非单独识别中性粒细胞。研究局限性包括样本量较小、雄性为主、孕期和哺乳期雌性释放、采样期短、麻醉效应、夜间捕获相关样本处理时间、缺乏手动血细胞计数及基于涂片的血小板估算等。尽管如此，该研究提供了巴西马托格罗索州食果蝙蝠的首次血液学描述，为未来研究提供基线数据。方法间比较表明，自动血液分析仪在蝙蝠中应谨慎使用，推荐自动与手动方法联合应用。需要更大样本量和更长采样期的进一步研究，以实现稳健的性别相关分析、标准化自动技术，并为人类化环境中的蝙蝠建立更一致和更有代表性的血液学参数。研究结论翻译：尽管如此，本研究提供了巴西马托格罗索州食果蝙蝠的首次血液学描述，并为未来研究提供了基线数据。方法间比较表明，自动血液分析仪在蝙蝠中应谨慎使用，推荐自动与手动方法联合应用。需要更大样本量和更长采样期的进一步研究，以实现稳健的性别相关分析、标准化自动技术，并为人类化环境中的蝙蝠建立更一致和更有代表性的血液学参数。