METTL3通过调控lncRNA SNHG14/miR-195a-5p/ACSL4轴触发铁死亡导致缺血/再灌注所致的心肌损伤

《Cardiovascular Drugs and Therapy》：METTL3 Confers Ischemia/Reperfusion-Caused Myocardial Injury by Triggering Ferroptosis via Regulating the lncRNA SNHG14/miR-195a-5p/ACSL4 Axis

摘要

背景

铁死亡被认为是心肌缺血-再灌注损伤（MIRI）的关键诱导因素。甲基转移酶样蛋白3（METTL3）已被广泛报道参与调控铁死亡，然而，METTL3在MIRI后铁死亡中的作用及机制尚不清楚。

方法

建立心肌缺血/再灌注（I/R）小鼠模型，并通过TTC染色评估梗死面积。通过HE染色和免疫组化评估心肌损伤和氧化应激。采用ELISA检测血清心肌损伤标志物（TnT、CK-MB、LDH）。在缺氧/复氧（H/R）条件下培养原代小鼠心肌细胞。分别通过qRT-PCR和Western blot评估RNA和蛋白水平。分别采用CCK-8、ELISA和DCFH-DA assay检测细胞存活率、Fe²⁺含量和氧化应激水平。通过比色法m6A检测试剂盒测定全局m6A水平。通过RIP、RNA pull-down和双荧光素酶报告基因检测验证分子相互作用。

结果

I/R损伤后心脏组织中全局m6A修饰水平及包括METTL3、METTL14和WTAP在内的"写入酶"蛋白表达均升高。此外，下调METTL3可缓解I/R小鼠和H/R诱导的心肌细胞中的心肌损伤和铁死亡。机制上，METTL3直接与长链非编码RNA SNHG14（lncRNA SNHG14）相互作用，并通过催化m6A修饰上调其表达。lncRNA SNHG14过表达削弱了METTL3敲低对H/R诱导的心肌细胞铁死亡的保护作用。此外，lncRNA SNHG14作为miR-195a-5p的海绵，增强ACSL4的表达。敲低miR-195a-5p逆转了METTL3/lncRNA SNHG14沉默对心肌细胞铁死亡的保护作用。

结论

我们的结果表明，METTL3通过调控lncRNA SNHG14/miR-195a-5p/ACSL4轴信号通路促进MIRI后心肌细胞的铁死亡，这为MIRI的治疗提供了新的靶点。